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ottchen

铁虫 (小有名气)

[求助] 建库于载体中指的是什么?转化大肠杆菌指的是什么? 已有1人参与

提取土壤中的微生物总DNA,以通用引物扩增16S rRNA 基因,并构建于载体上,转化大肠杆菌,建立16S rRNA 基因文库,随即选取一定数量的克隆,以特定的限制性内切核酸酶消化16S rRNA 基因,通过电泳分析消化后的片段长度多态性,来反映微生物群落结构的多样性。

在这个技术路线中,建库于载体中指的是将扩出来的DNA与质粒等载体结合吗?转化大肠杆菌这个过程中,一个大肠杆菌细胞只有一条16S rRNA基因被转入吗?还是多条?一般我们选取多少个克隆来进行分析,为什么?谢谢!

[ Last edited by ottchen on 2013-12-3 at 08:21 ]
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

将扩增出来的产物与载体连接,再将其转入大肠杆菌;一个大肠杆菌细胞中只有一种质粒可以大量复制
一般一个样品50-80就可以了
2楼2014-03-27 21:19:17
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