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小灰灰130

新虫 (初入文坛)

[交流] 引物设计

我要做基因的真核表达，我用的内切酶是xhoI 和 EcoRI,我想请教各位怎么判断酶切后会不会发生移码，下面是我要用到的表达载体图谱，还有就是我的目的基因和质粒载体各自都有自己的起始密码子和终止密码子，设计引物时是不是直接把目的基因的终止密码子去掉就行了啊，请大家多多指教啊！
引物设计
pDsRed-N1.jpg
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1楼 2013-11-27 21:25:30
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redleaf16

铁虫 (初入文坛)
★
小灰灰130(金币+1): 谢谢参与
是的。最好再把你的表达基因去掉信号肽，然后查询自己的载体是否需要加入移码的碱基，再酌情修改就可以了
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3楼2013-11-29 11:47:36
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小灰灰130

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by redleaf16 at 2013-11-29 11:47:36
是的。最好再把你的表达基因去掉信号肽，然后查询自己的载体是否需要加入移码的碱基，再酌情修改就可以了

谢谢你的回答，我就是不太明白怎么判断是否会发生移码，是不是目的基因酶切之后克隆到载体里面，然后就从目的基因的起始密码一直数载体基因的起始密码，只要是3的倍数就行啊？
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5楼2013-11-29 21:26:49
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小灰灰130(金币+1): 谢谢参与
小灰灰130: 金币+1 2013-12-01 16:38:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小灰灰130 at 2013-11-29 21:26:49
谢谢你的回答，我就是不太明白怎么判断是否会发生移码，是不是目的基因酶切之后克隆到载体里面，然后就从目的基因的起始密码一直数载体基因的起始密码，只要是3的倍数就行啊？...

是的 要保证ORF不错位
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6楼2013-12-01 08:41:33
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小灰灰130

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-12-01 08:41:33
是的 要保证ORF不错位...

目的基因的起始密码子和终止密码子对克隆后的重组载体的表达有影响吗？是必须去掉吗？是去掉一个还是起始密码子和终止密码子都必须去掉呢？
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7楼2013-12-01 16:45:20
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neu2342楼
2013-11-28 17:07   回复  
小灰灰130(金币+1): 谢谢参与
kiss200855374楼
2013-11-29 14:25   回复  
小灰灰130(金币+1): 谢谢参与
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