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jianfengliu888

[求助] 关于高效液相（HPLC）的求助

关于高效液相（HPLC）的求助

我现在想着用高效液相的方法测定一下海藻糖的浓度，不过是出现了在正峰的后边紧接着出现了倒峰，我用的是乙腈：水=70：30的流动相， 进液量为50微升，速度是1ml/min,氨基健和相柱，示差检测器，water公司的HPLC，想着把倒峰出去，怎么办？？
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1楼 2007-12-20 17:13:08
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xrlxrl

至尊木虫 (正式写手)
出现倒峰很可能是漏气了，以前我出现这种情况的时候是仪器漏气。
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不是做不到，而是没有下功夫！
2楼2007-12-20 17:20:40
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haihaixia666

银虫 (正式写手)
倒峰的出现可能是检测器的极性接反了，改正后即可变成正峰。用示差折光检测器时，如果组分的折光指数低于流动相的折光指数，也会出现倒峰，这就需要选择合适的流动相。如果流动相中含有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，无吸收的组分就会产生倒峰，因此必须用高纯度的溶剂作流动相。在死时间附近的尖锐峰往往是由于进样时的压力变化，或者由于样品溶剂与流动相不同所引起的。
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3楼2007-12-20 17:48:40
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
出现倒峰也是很正常的，只是在计算面积的时候，要手动积分，就是用软件里的手动划基线的工具，自己划一条基线就OK了，只是这样积分出来的面积会引人而异，但软件本身积分的结果也不能完全相信，有负峰 的时候积分的面积就很不可靠
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为梦想努力。
4楼2007-12-20 19:58:34
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
进样量是不是太多了，50ul啊，一般也就5-20ul
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为梦想努力。
5楼2007-12-20 19:59:42
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jianfengliu888

我当时没有用紫外，因为海藻糖是不能用紫外的，另外极性不可能接反的是工程师给我们接的从来没有动过的
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6楼2007-12-21 21:49:58
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含笑天天

银虫 (正式写手)

应该是水峰啊

出现倒峰，一般是样品中的物质相对于流动相来说，吸收更弱造成的，样品中的水溶剂相对于流动相来说，吸收更弱，流动相经过基线归零后，样品中的水自然会出现负峰
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虫虫虫虫
7楼2007-12-22 00:26:27
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supersufang938

木虫 (正式写手)
应该是溶解样品的溶剂峰，尽量用流动相溶解样品
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8楼2007-12-22 08:27:47
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caixq

铁杆木虫 (正式写手)

我感觉出现倒峰的原因是:正峰后面的那种物质吸光度小于流动相的吸光度

我感觉出现倒峰的原因是:正峰后面的那种物质吸光度小于流动相的吸光度,想完全除去倒峰不太容易，我建议你可以试试
1,可以在流动相中加入合适的缓冲盐，这样有可能缓解倒峰的高度，最终的浓度要根据实验结果确定。
2，可以优化分离条件，改变有机相与水相的比例，使正峰和倒峰出峰时间间隔延长，这样就可以避免倒峰对你的目标峰的干扰了。
不知我的解答能不能让你满意！
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9楼2007-12-22 17:06:09
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caixq

铁杆木虫 (正式写手)
另外，在不影响检测的前提下可以减小进样量，这样倒峰的峰高峰面积也会减少。
我个人认为，优化分离条件，增大目标峰与倒峰出峰时间的间隔的方法最可行
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10楼2007-12-22 17:12:26
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