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baima

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虫号: 219034

[交流] 关于细菌基因组DNA抽提的问题!!!

各位大虾,最近我提细菌基因组DNA出了问题,提出来后跑电泳是多条带(见下图),我以前一直都提得很好,方法和以前的一样,可怎么提都是很多条带,拜托各位帮我分析到底是什么原因,不胜感激!

方法:根据《新编分子生物学实验指南》提供的方法进行。
(1)培养5 mL的细菌培养物至饱和状态，取1.5 mL的培养物10000 r/min，离心2 min；
(2)沉淀物加入567uL的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。加入3OuL 10％的SDS和3uL 20 mg/mL的蛋白酶K，混匀，于37℃ 温育1h；
(3)加入100uL 5 mol/L NaC1，充分混匀，再加入8OuL CTAB/NaCl溶液，混匀，于65℃ 温育1Omin；
(4)加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，8 000r/min离心5 min，将上清液转入一个新管中；
(5)加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，8 000r/min离心5 min，将上清移入一只新管中；
(6)加人0．6体积的异丙醇，轻轻混合，室温放置30min，直到DNA沉淀下来，12000 r/min离心10min；
(7)弃上清，加入1 mL 70％的乙醇洗涤，12000r/min离心15 min；
(8)弃上清，干燥，重溶于50uL的灭菌水。

[ Last edited by telomerase on 2007-12-17 at 23:07 ]

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