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thegodlin

新虫 (初入文坛)

[求助] 急急急,请问FITC溶液怎么配

FITC的量子产量有0.93,这是在什么样的溶液里得到的,pH是多少,激发是多少有人知道么?万分感谢!
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a46750

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5-FITC   494/520
 参考: FITC标记抗体流程:
  (1) 将待交联的蛋白(浓度31mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。
  (2) 将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光。
  (3) 按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中,边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀,暗处4℃反应8h。
  (4) 加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L,4℃终止反应2h。
  (5) 将交联物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。
  (6) 交联物的鉴定
  蛋白浓度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
  F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],该值应介于2.5~6.5之间。
  (7) FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃避光保存。
.........
2楼2013-11-13 16:16:56
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thegodlin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a46750 at 2013-11-13 16:16:56
5-FITC   494/520
 参考: FITC标记抗体流程:
  (1) 将待交联的蛋白(浓度31mg/mL)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0。交联反应液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。
  ( ...

你好谢谢你的回复,我想用fitc作为参比物,测其他物质的量子产率,所以我想知道的是,fitc达到其0.93的量子产率时的要求是什么?
3楼2013-11-13 18:27:59
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a46750

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by thegodlin at 2013-11-13 18:27:59
你好谢谢你的回复,我想用fitc作为参比物,测其他物质的量子产率,所以我想知道的是,fitc达到其0.93的量子产率时的要求是什么?...

FITC对环境的pH较为敏感,特别是羧酸根的质子化会明显降低其荧光量子产率。看了一下一般DMSO或者acetone
pH是7.4-9,浓度不确定
.........
4楼2013-11-14 08:43:03
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