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急急急，请问FITC溶液怎么配
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| FITC的量子产量有0.93，这是在什么样的溶液里得到的，pH是多少，激发是多少有人知道么？万分感谢！ |
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a46750
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【答案】应助回帖
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5-FITC 494/520 参考： FITC标记抗体流程： (1) 将待交联的蛋白(浓度31mg/mL)对交联反应液透析三次4℃，至pH=9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。 (2) 将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。 (3) 按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4℃反应8h。 (4) 加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L，4℃终止反应2h。 (5) 将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。 (6) 交联物的鉴定 蛋白浓度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4 F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ]，该值应介于2.5～6.5之间。 (7) FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。 |
2楼2013-11-13 16:16:56
3楼2013-11-13 18:27:59
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