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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB检测蛋白表达量时关于上样量的问题？
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hiusifhd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-12 10:47:50
上样buffer的量根据样品体积+水的体积之和计算。保证每孔中的loading buffer总量是一样的，这样跑出来的胶才漂亮。...

请问下上样buffer与样品+水体积之和的比例是多少
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11楼2013-11-13 13:27:17
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wuyao0513

新虫 (小有名气)
没看懂方法是按测出的蛋白量加4×上样缓冲液（3:1）,然后用1×上样缓冲液都补至每孔15微升？
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12楼2013-11-13 15:25:12
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hiusifhd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-11-13 15:25:12
没看懂方法是按测出的蛋白量加4×上样缓冲液（3:1）,然后用1×上样缓冲液都补至每孔15微升？

对，不知道这样是否正确
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13楼2013-11-13 19:16:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by hiusifhd at 2013-11-13 13:27:17
请问下上样buffer与样品+水体积之和的比例是多少...

根据你的上样buffer的浓度。如果你的上样buffer是4X，就是3:1（样品+水是3）。
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14楼2013-11-14 02:43:59
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hiusifhd

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-14 02:43:59
根据你的上样buffer的浓度。如果你的上样buffer是4X，就是3:1（样品+水是3）。...

多谢了，我去试试
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15楼2013-11-14 13:43:59
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

第一，你可以先用Bradford法定量你的总蛋白浓度，再进行WB

第二，非得用SDS_PAGE定量的话，要先统一上样量，待染色-脱色后在根据不同条带的亮度适当增减，再重新电泳；依次类推，直至每个条带都一致后再转膜进行WB
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酷爱の族
16楼2014-01-21 11:33:43
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

SDS-PAGE胶测浓度很不准，上样量不准在情理之中
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17楼2014-01-22 10:16:25
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