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请帮忙翻译或者找出这两项操作的英文说明
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之前没有看过太多的英文文献，我觉得应该有直接的英文表达 求大神帮忙啊。。。蛋白质的提取、纯化与定量 采用三氯乙酸/丙酮法制备大白菜叶片蛋白质丙酮干粉：称取1g材料，加入液氮研成粉末；移入10ml的离心管中，加入7ml预冷的10%TCA（丙酮配制，内含0.07%β-巯基乙醇），充分涡旋后-20℃下过夜，4℃、15000×g条件下离心30min，弃上清；加入7ml预冷丙酮（含0.07%β-巯基乙醇），涡旋混匀，-20℃沉淀2小时，期间每隔一定时间振荡一次，4℃、15000×g条件下离心30min，弃上清；加入7ml 80%冷丙酮（含0.07%β-巯基乙醇），涡旋混匀-20℃沉淀2小时，同上离心；将沉淀冷冻干燥成粉末，直接裂解或-80℃保存备用。按每mg蛋白质样品干粉加入10-20μl样品裂解液（7.0 mol/L尿素（Urea）、2.0 mol/L硫尿（thiourea）、4%（w/v）CHAPS、60 mmol/L二硫苏糖醇（DTT）、0.5%（v/v）IPG buffer）溶解，35℃恒温水浴2h或反复液氮冻融3次（期间充分涡旋），样品溶解后同上离心，取上清液。采用Bradford 蛋白定量试剂盒进行蛋白质定量。 双向电泳（2-DE） 上样量为200ug，样品用上样缓冲液（7.0 mol/L尿素（Urea）、2.0 mol/L硫尿（thiourea）、4%（w/v）CHAPS、60 mmol/L二硫苏糖醇（DTT）、0.5%（v/v）IPG buffer）稀释。沿IPG胶条槽缓慢均匀加入，将IPG胶条胶面朝下覆盖在样品上, 用2ml矿物油覆盖，防止样品挥发。设置等电聚焦程序(24cm,PH=4-7)，胶条水化和等电聚焦按IPGphorⅡTM等电聚焦系统指南进行。运行环境为20℃恒温下，50V水化12 h后；按500V，1h；1000V，1 h；1000-8000V，1 h；8000V，10 h；500V，10 h。等电聚焦结束后，将胶条在平衡液A（6.0 mol/L尿素（Urea）；2%（w/v）SDS；30%Glycerol；1.5 M Tris-HCl（pH8.8）；65 mM DTT），摇床振荡平衡15min；平衡液B（6.0mol/L尿素（Urea）；2%（w/v）SDS；30%Glycerol， 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）；135mmol/l碘乙酰胺），水平摇床平衡15分钟。采用EttanTM DALT Six垂直板电泳系统进行第二向SDS-PAGE恒温（18℃）电泳，起始时用低电流10mA，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，再加大电流至20mA，溴酚蓝前沿到达距玻璃板底部1cm处，结束电泳。采用银染法，30min。 |
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