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冷冻切片HE染色空泡问题如何解决 ?
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我做的是骨骼肌组织的横切片,HE染过之后有很多片子染的效果都不错,但很多片子小圆柱状的肌纤维中间都有小空泡,问题片子中间的肌纤维最严重,边缘的染出来有的肌纤维还挺完整.染液是买的,比较好.片子是用德国莱卡切片机做的,12微米厚,当时专门选的非常完整的片子,应该不是切片的问题.玻片用APES处理过. 我的步骤和工艺是 : 切片,切完后在负20度冰箱短期保存(不超过一周), 片子从冰箱取出, 在空气中晾去玻片上的水气和冰霜(大概3-5分钟), 自来水漂洗2秒, 苏木素染色3分钟左右, pH7.4 的PBS返蓝10秒, 蒸馏水洗2分钟, 75%酒精脱水 80%酒精 伊红(醇溶性的)染色40秒 80%酒精漂洗 95%酒精脱水 无水酒精1，无水酒精2分别2分钟 二甲苯1通透3分钟，二甲苯2通透5分钟 树胶封片 [ Last edited by meizhou on 2007-12-8 at 20:52 ] |
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