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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心,不没于物

[求助] 冷冻切片HE染色空泡问题如何解决 ?

我做的是骨骼肌组织的横切片,HE染过之后有很多片子染的效果都不错,但很多片子小圆柱状的肌纤维中间都有小空泡,问题片子中间的肌纤维最严重,边缘的染出来有的肌纤维还挺完整.染液是买的,比较好.片子是用德国莱卡切片机做的,12微米厚,当时专门选的非常完整的片子,应该不是切片的问题.玻片用APES处理过.

我的步骤和工艺是 :

切片,切完后在负20度冰箱短期保存(不超过一周),
片子从冰箱取出,
在空气中晾去玻片上的水气和冰霜(大概3-5分钟),
自来水漂洗2秒,
苏木素染色3分钟左右,
pH7.4 的PBS返蓝10秒,
蒸馏水洗2分钟,
75%酒精脱水
80%酒精
伊红(醇溶性的)染色40秒
80%酒精漂洗
95%酒精脱水
无水酒精1,无水酒精2分别2分钟
二甲苯1通透3分钟,二甲苯2通透5分钟
树胶封片


[ Last edited by meizhou on 2007-12-8 at 20:52 ]

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《memory》---BarbaraStreisand
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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心,不没于物

请大家帮我看看空泡的形成是什么原因,怎样才能染出完整的片子
《memory》---BarbaraStreisand
2楼2007-12-08 20:56:37
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meizhou

木虫 (知名作家)

沉墨于心,不没于物

都没有人懂吗 ?
《memory》---BarbaraStreisand
3楼2007-12-10 18:28:38
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