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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 求蛋白质含量检测操作规程
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shiyanrui

木虫 (正式写手)
主要是生产过程的控制
最好能便宜点，并且快速的．请大伙多多帮忙啊～
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女人就是酚羟基
11楼2007-12-04 10:31:56
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lhw718

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
shiyanrui(金币+5,VIP+0):谢谢
用考马斯亮蓝法
标准蛋白质溶液  称取牛血清蛋白10mg，溶于蒸馏水中定容至100ml
考马斯亮蓝G-250试剂 称取100mg考马斯亮蓝，溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（m/v）的磷酸100ml，用蒸馏水定容至1000ml
然后做标准曲线
管号        1        2        3        4        5        6
标准液ml        0        0.2        0.4        0.6        0.8        1.0
蒸馏水ml        1        0.8        0.6        0.4        0.2        0
G-250        5        5        5        5        5        5
含量ug        0        20        40        60        80        100
取6支具塞试管，编号后，加入以上试剂
放置2min后在595nm波长下比色测定（比色测定在1h内完成）以牛血清蛋白含量ug为纵坐标，绘出标准曲线
样品测定
1.称取样品适量（看你样品中蛋白的含量可以先少取一些200mg左右）加蒸馏水5ml放在冰浴上研磨成匀浆。离心（6000r/min 10min）将上清液倒入10ml容量瓶中，再向残渣中加2ml蒸馏水，离心10min，合并上清液，定容至刻度
2.另取一支试管，准确加入0.1ml样品提取液，再加入0.9ml蒸馏水，5ml考马斯亮蓝G-250充分混合，放置2min，以标准曲线1好试管做参比，在595nm波长下比色，记录吸收度
结果计算
代入标准曲线算出蛋白质的量
如果你测得的值比较大可以稀释以后再测，不过你要记好稀释的倍数哦！
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12楼2007-12-04 18:40:22
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