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doudou

金虫 (初入文坛)

[交流] 请教各位，蛋白表达

我想做个蛋白表达，在构建载体时将我的目的基因的ATG同下游的6his和TAA保证了同框，是否还需要和上游的启动子序列保证同框呢？
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1楼 2007-12-02 13:42:57
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sxyxs13754

木虫 (著名写手)

小木虫的饭
抢个沙发坐,闪过
专业不对口
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摆线传动 Q:181693841
2楼2007-12-02 18:24:17
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clocksoar

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
doudou(金币+5,VIP+0):谢谢！我做的是真核表达，可否再问你个问题？
不需要和上游的启动子序列保证同框，因为翻译起始是从你的目的蛋白ATG开始的，并不需要管前面是什么。
此外需要注意，你做的是真核表达还是原核表达？
原核表达载体你的目的片段前面应该有启动子、操纵子、核糖体位点，不要在他们之间的位点插入，只需记住在你载体的多克隆位点插入就没事了。
此外，真核表达载体有的没有Kozak序列，需要自己添加！
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3楼2007-12-03 18:02:50
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doudou

金虫 (初入文坛)
我做的是真核表达，ATG前已加上了Kozak序列，但目前表达载体的启动子是我从其他表达载体上扩增出来并连接到我的载体上的以替换原有的启动子。请问这样能正常表达吗？
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4楼2007-12-04 09:00:12
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clocksoar

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
doudou(金币+5,VIP+0):谢谢你了，我准备先做个瞬转和western鉴定一下。
你从其他表达载体上扩增出来的启动子是真核的启动子吧，真核的启动子应该包含TATA盒，少数使用另一种Inr起始子。具体的我也忘了。如果只是在真核载体中替换启动子应该没问题，不过我也不敢打包票，没试过。祝您好运！
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5楼2007-12-04 10:13:46
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