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OBM2013

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[求助] 求RNA上某一碱基甲基化的检验方法？

除了用同位素放射检验16SrRNA上某一碱基甲基化与否外，还有没有别的方法比较简便的验证16SrRNA上的某一碱基是否发生甲基化？求各位大侠赐教！！

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成就理想

1楼 2013-10-09 23:30:19

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OBM2013

铜虫 (小有名气)

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除了用同位素放射检验16SrRNA上某一碱基甲基化与否外，还有没有别的方法比较简便的验证16SrRNA上的某一碱基是否发生甲基化？求各位大侠赐教！！

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成就理想

2楼2013-11-03 09:31:23

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deng神之刺客

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
OBM2013: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-11-20 11:16:51
OBM2013: 金币+15, ★有帮助 2014-01-08 19:46:06

根据不同检测方法的原理及其发展先后 ,大致可分为三类: (1)将RNA降解为单核苷酸而后采用化学分析仪器如液相色谱或质谱对甲基化与非甲基化的胞嘧啶进行区分; (2)用序列特异性甲基化内切酶使RNA 部份降解 ,通过Nouthern印迹区分甲基化与非甲基化的相关序列;(3)利用亚硫酸氢钠(BISULFITE)预处理 RNA,直接通过引物延伸反应或耦联其他机制对甲基化与非甲基化的胞嘧啶进行区分

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3楼2013-11-03 10:58:39

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OBM2013

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引用回帖:

3楼: Originally posted by deng神之刺客 at 2013-11-03 10:58:39
根据不同检测方法的原理及其发展先后 ,大致可分为三类: (1)将RNA降解为单核苷酸而后采用化学分析仪器如液相色谱或质谱对甲基化与非甲基化的胞嘧啶进行区分; (2)用序列特异性甲基化内切酶使RNA 部份降解 ,通过Nouthe ...

首先很感谢你回我的帖子，针对你提出的三类方法，新手的我还是有不明白的地方：（1），RNA不是很容易降解的吗，你是如何保证RNA降解为单核苷酸后不会继续降解呢？还有那个液相色谱或质谱只能检测到胞嘧啶是否甲基化吗？其他碱基还可不可以呢？（2），有专门用于RNA的特异性甲基化内切酶吗？（3），你所说的引物延伸反应是指跟PCR差不多吗？若是的话，延伸合成的RNA就不会有甲基化的碱基了，我是这么认为的。
请大侠赐教小弟，衷心的感谢！！

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成就理想

4楼2013-11-05 12:57:54

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