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PCR引物设计 已有5人参与
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大家好， 我现在在做PCR ，设计了一对引物。刚开始的时候，结果很好，大小以及测序都是正确的。但是最近几次却出现跑胶弥散的现象，没有目的条带。我用的是cDNA作为模板，我用同样的模板、酶、buffer做内参基因以及其他的基因都很好，就是我现在的这一基因，我快急死了，请高手帮帮我！！！ 上游引物：5' CCA AGA CTC TGT ATG GAG TG 3' 下游引物：5' GGT CAC TGG AAG ATA TGG C 3' mRNA序列： 1 tgtgctgtgt gtcagagtgg attggagttg aaaaagcttg actggcgtca ttcgggagct 61 ggatggcttg ggacatgtgc agccaagact ctgtatggag tgacatagag tgtgctgctc 121 tggttggtga ggaccagcct ctttgcccag atcttcctga acttgacctt tctgaacttg 181 atgtgaatga cttggataca gacagctttc tgggtggatt gaagtggtgt agcgaccaat 241 cggaaatcat atccaaccag tacaacaatg agcctgcgaa catatttgag aagatagatg 301 aagagaatga ggcaaacttg ctagcggtcc tcacagagac actggacagt ctccccgtgg 361 atgaagacgg attgccctca tttgatgcac tgacagatgg agccgtgacc actgacaacg 421 aggccagtcc ttcctccatg cctgacggca cccctccccc tcaggaggca gaagagccgt 481 ctctacttaa gaagctctta ctggcaccag ccaacactca gctcagctac aatgaatgca 541 gcggtcttag cactcagaac catgcagcaa accacaccca caggatcaga acaaaccctg 601 ccattgttaa gaccgagaat tcatggagca ataaagcgaa gagcatttgt caacagcaaa 661 agccacaaag acgtccctgc tcagagcttc tcaagtatct gaccacaaac gatgaccctc 721 ctcacaccaa acccacagaa aacaggaaca gcagcagaga caaatgtgct tccaaaaaga 781 agtcccatac acaaccgcag tcgcaacatg ctcaagccaa accaacaact ttatctcttc 841 ctctgacccc agagtcacca aatttgtttt tataaatgtg ccatatcttc cagtgacccc 901 aagggttccc catttgagaa caagactatt gagcgaacct taagtgtgga actctctgga 961 actgcaggcc taactcctcc cacaactcct cctcataaag ccaaccaaga taaccctttc 1021 aaggcttcgc caaagctgaa gccctcttgc aagaccgtgg tgccaccgcc aaccaagagg 1081 gcccggtaca gtgagtgttc tggtacccaa ggcagccact ccaccaagaa agggcccgag 1141 caatctgagt tgtacgcaca actcagcaag tcctcagggc tcagccgagg acacgaggaa 1201 aggaagacta aacggcccag tctccggctg tttggtgacc atgactactg tcagtcactc 1261 aattccaaaa cggatatact cattaacata tcacaggagc tccaagactc tagacaacta 1321 gacttcaaag atgcctcctg tgactggcag gggcacatct gttcttccac agattcaggc 1381 cagtgctacc tgagagagac tttggaggcc agcaagcagg tctctccttg cagcaccaga 1441 aaacagctcc aagaccagga aatccgagcg gagctgaaca agcacttcgg tcatccctgt 1501 caagctgtgt ttgacgacaa atcagacaag accagtgaac taagggatgg cgacttcagt 1561 aatgaacaat tctccaaact acctgtgttt ataaattcag gactagccat ggatggccta 1621 tttgatgaca gtgaagatga aagtgataaa ctgagctacc cttgggatgg cacgcagccc 1681 tattcattgt tcgatgtgtc gccttcttgc tcttccttta actctccgtg tcgagactca 1741 gtgtcaccac cgaaatcctt attttctcaa agaccccaaa ggatgcgctc tcgttcaaga 1801 tccttttctc gacacaggtc gtgttcccga tcaccatatt ccaggtcaag atcaaggtcc 1861 ccaggcagta gatcctcttc aagatcctgt tactactatg aatcaagcca ctacagacac 1921 cgcacacacc gcaattctcc cttgtatgtg agatcacgtt caaggtcacc ctacagccgt 1981 aggcccaggt acgacagcta tgaagcctat gagcacgaaa ggctcaagag ggatgaatac 2041 cgcaaagagc acgagaagcg ggagtctgaa agggccaaac agagagagag gcagaagcag 2101 aaagcaattg aagagcgccg tgtgatttac gttggtaaaa tcagacctga cacaacgcgg 2161 acagaattga gagaccgctt tgaagttttt ggtgaaattg aggaatgcac cgtaaatctg 2221 cgggatgatg gagacagcta tggtttcatc acctaccgtt acacctgtga cgctttcgct 2281 gctcttgaga atggatatac tttacgcagg tcgaacgaaa ctgacttcga gctgtacttt 2341 tgtggacgga agcaattttt caagtctaac tatgcagacc tagataccaa ctcagacgat 2401 tttgaccctg cttccaccaa gagcaagtat gactctctgg attttgatag tttactgaag 2461 gaagctcaga gaagcttgcg caggtaacgt gttcccaggc tgaggaatga cagagagatg 2521 gtcaatacct catgggacag cgtgtccttt cccaagactc ttgcaagtca tacttaggaa 2581 tttctcctac tttacactct ctgtacaaaa ataaaacaaa acaaaacaac aataacaaca 2641 acaacaacaa caataacaac aacaaccata ccagaacaag aacaa |
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12楼2016-08-16 00:45:31
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