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yanzhang722

木虫 (正式写手)

[交流] 求助:怎样铺制备板

我想铺20*20的制备板，请问用多大浓度的CMC,这么大的板子用多少硅胶？硅胶和CMC的比例是多少？请指教
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1楼 2007-11-29 16:04:19
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tianruibencao

荣誉版主 (正式写手)
★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！
你用0.3%就可以了.--这是药检所老师的经验.
中国药典上说的1份固定相3分水或含有黏合剂的液体.我们是按照上面作的.你的比例有点大,黏合剂多了.
要薄层板自然干燥后,要完全干燥.可以温热,我们有时候放在烘箱的上部(外面)一般不会有你的问题.待使用是110摄氏度烘.

板子不能铺的太厚,或则容易开裂.一定要让板子自然风干后再进行加热,或则也一定会开裂的。

载板要求平滑清洁，没有划痕，在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干。准备大烧杯一个，加蒸馏水，称取CMC-Na适量，均匀洒在液面上，然后加热，并不断搅拌以至完全溶解。加热CMC-Na溶液至沸腾后，静置放冷，用脱脂棉过滤，得清澈、透明的溶液。注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，而且可能有霉菌出现，绝对不能再使用。
取1份固定相3分水或含有黏合剂的液体，缓缓倒入大研钵中，与CMC溶液混合，充分研磨成均匀糊状。硅胶和CMC-Na溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。研磨时可以一个人研磨，一个人缓慢的倒CMC-Na溶液。研磨时要顺着一个方向，速度不宜过快，要顺着研钵的边缘，仔细观察，一定要把气泡除去。研磨好的糊状硅胶应该是比较均匀的，用研棒粘取，以成连珠状不成线状下滴为好。
研磨时可以加几滴乙醇或者丙酮，可起到消泡的作用。
将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。尤其是载板的四个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。
定要让铺好的板要选择平整的地方放置，自然风干后再进行加热,，否则难以保证板面硅胶的厚度均匀，再在110℃活化，活化时间为30分钟，冷却后即可使用。注意薄层烘干的时候最好不要在带鼓风的烘箱中烘，容易起皱，或者破裂。
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2楼2007-11-29 16:43:59
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耗子怕猫

金虫 (小有名气)


0.5%的也行,按1:3.5吧,因为溶剂会挥发一点,所以可以多点

其他就不发言了，楼上的帖子很详细
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3楼2007-11-29 19:26:01
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独步青云

新虫 (职业作家)

术中小生
★
karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢提供！
总结－薄层色谱的制备
关于配制CMC-Na：
先将称好的CMC加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,在加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.
溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.4％～0.5％最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞.
0.5%CMC-Na与水浴溶涨至充分搅拌溶涨，如果不好溶涨，可在溶胀前加几滴乙醇，比较好溶，但是尽量不加，因为加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。充分溶胀后，用脱脂棉垫到布氏漏斗上抽滤。封口冷藏待用。
（1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，而且可能有霉菌出现，绝对不能再使用。
（2）如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了！）有个办法过滤CMC溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。  CMC-Na是一种高分子材料,而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀,溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的CMC-Na少量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,使其溶胀,之后可以置于水浴锅内加热溶解,当然如果你不是很急着用的话也完全可以,直接用水泡着放那,估计十天半月的也可以用了.
CMC-Na的配制，大家也说了很多，我只是想说一下在CMC-Na的溶解过程中，可以使用可进行加热操作的磁力搅拌器，大概搅拌5小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。.CMC-Na后处理，很多人说是过滤，或者抽滤，我觉得可能速度很慢，而且又容易浪费。我的做法是离心，5000rpm离心20min。倒出上清液，（非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染。）更难能可贵的是，我可以收集下面没有充分溶解的CMC-Na。继续加到水中，还可以配制！！何乐而不为呢？
铺CMC-Na的薄层板,先将CMC-Na溶解完全,可将溶解成所需浓度加热后超声处理,再抽滤,可很快得到上清液
关于薄层板的要求：
1.载板要求平滑清洁，没有划痕，在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，干。  
2. 怎么样的玻璃算是干净：就是用洗洁精浸泡也好，用酸浸泡也好，当你觉得洗干净的时候，拿在手上立起来，如果发现水不是呈股流下，而是呈瀑布状态流下，那么说明你的玻璃已经洗干净了。其实真正洗干净的玻璃，很快就可以晾干的。
3．怎样清洗用过后的薄层板，我试着用了洗衣粉、洗洁净，反复洗了数遍，仍然挂水珠。铺制薄层板要求玻璃板干净、整洁、不挂水珠的。建议用洗液泡。如果还解决不了那就只好放弃这块玻璃板了，有说可以用盐酸的。
关于研磨及铺板要求：
1. 取薄层层析硅胶重量与CMC-Na的体积比为1：4的比例（该比例能使硅胶板铺出的效果较好不至于掉渣也不至于板太硬）充分混合碾磨，至拿起碾锤能看到混合液与碾锤有一定的粘连。即好。薄层板一定要光滑无油污，取一定量的溶液置板上，用薄棒引导使其铺满板面，一手托起硅胶板另一手在下轻轻敲，转动板子均匀的敲匀。
2. 硅胶的研磨，当然是一个方向了，可以适量的加入一定量的无水乙醇或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后放在干净容器内超声，效果都是不错的。手工铺硅胶的用量一般10*20的约3～4克，硅胶和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3，具体根据要铺板子的厚度和CMC-Na的浓度决定。
3．依据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒到薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜层析板，使吸附剂流至层析板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜层析板，使吸附剂回流；然后是另外两个方向，重复上述操作，后轻颠几下薄层板即可。
4. 将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。尤其是载板的四个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀。
5. 铺制好的薄层板先让其稍干后,即看不出有明显的水印,放入烘箱内用50度以下的温度并开鼓风干燥30分钟,再升温干燥至干,注意升温过快在使用的过程中有可能发生起层的现象不利于分离,以上方法经本人两年多的实践效果较好且耗时又不太长。
6. 10g吸附剂加入3滴95％乙醇以驱赶气泡；
关于展开剂：
分离的样品酸性比较大，一般在展开剂中加酸。加甲酸是因为该样品是酸性的，加酸的量和该物质的酸性成正比关系，加水可能是因为你的样品是苷类的用酸水做一下缓冲，目的就是让斑点圆滑，不脱尾，展距良好。饱和也非常重要，边缘效应很严重的不妨用下端浸在展开剂中的滤纸贴在展开缸的内壁，这样饱和效果会好一些
1)在层析缸口涂适量凡士林，增加密封性； 2)以展开剂边缘效应的大小，确定展开剂平衡时间的长短，一般平衡时间在30分钟即可。
有机溶剂的极性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水 （10:1:0.6）这个展开剂中，如果极性略大，可适当降低甲醇比例；如极性太小，可适当增大甲醇比例。氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 极性肯定是相同的，这有问题吗？!P l¬NY"j C ^Q j p¬t:|+X 另外还有一个问题，这个展开剂中，甲醇用量较小，而甲醇又易挥发，容易产生边缘效应，要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。 不同的展开系统意思是其中至少应该有一种溶剂不同（最好是不同分类组的溶剂），而不是比例不同。或者使用不同的固定相。  
关于展开： TLC中样品拖尾现象是什么原因?该如何解决?
2.TLC中样品跑成几乎为一条线,斑点没有清晰的分离,想请教一下这是什么原因造成的?一般情况下该如何解决? 造成问题1的原因基本相同： a、对于一些具有酸碱性的化学成分，在溶液中部分电离，事实上展开时存在分子、离子两种状态，以中性的有机试剂展开必然会出现两种层析行为，造成脱尾甚至是一条线。4X'E1oD Y o I;R Eb、展开剂选择不当  c、点样量过大，样品超载解决办法：
a、在展开剂中加几滴甲酸或冰醋酸；   b、展开时以氨水饱和 c、减少点样量
d、参考文献，调整展开剂种类、比例  我想问问，关于TLC二次展开，是在第一次展开显色后再在继续第二次展开，还是在第一次展开后，换另一种展开剂接着展开啊？？
请哪位大侠指点一下关于TLC的二次展开。二次展开是依据样品定的，但肯定要在第一次展开后，将板晾干或吹干，再放入另一种展开剂中展开，有的样品二次展开还要换展开方向，和原方向垂直。所以要以实际分离样品需要而定。一般是因为样品成分多，极性差别有的大，有的关于显色： 在工作中研究过用硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，后改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1：3.5左右，而且研磨后要尽快涂布，不能易于凝固而难于涂布，我是百思不得其解，难道CMC还有类似稳定剂的作用
2. “0.5%的板加热时间长了就会黑”，是在层析完，显色后吧，我也遇到过同样的情况，这只有严格控制加热显色的时间。
这个问题应该是这样回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，若改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，但不加CMC辅的板又太软，点样时容易点出洞，有个好办法是将CMC的浓度调至0.1%，这样就不易烘黑的。不信你试试，我们这边药检所都这样做的
3. 关于薄层板加热变黑的问题，其实很容易解决：当喷完显色剂后不用在放烘箱里烘了，可以用电吹风在板子背面吹吹就能显色了．我们实验室里一般都采用此法，简便、快洁．如果一非想使用烘箱烘的话，一定要用带玻璃窗的，当看到显色了就取出，不然不好控制显色时间，时间过长，ＣＭＣ容易碳化变黑
4．各位楼主真是经验丰富，我铺的0.5%的板加热时间长了就会黑，有什么好着吗？
根据我的经验，薄层版变黑与CMC－Na的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的），我老师说这是因为浓硫酸把CMC－Na炭化了，其实[color=blue=这种情况你只要适当降低CMC-Na的浓度就可以了，当然如果不加CMC-Na的话容易把板弄破。一般我都是显色后用电吹风吹的，要均匀吹，电吹风离板的距离要远些，防止部分会黑。另还要注意显色剂，如果显色剂中含有硫酸，加热时间一定要掌握好，不可太长。
5．CP2000中277页苏氨酸的TLC的其它氨基酸检查似乎有问题: ...以"正丁醇\丁酮\浓氨溶液\水"为展开剂, 展开后,晾干,喷以茚三酮的丙酮溶液(1-50),... 茚三酮与浓氨溶液起显色反应, 弄得整块板都有色,茚三酮氧化苏氨酸后再与释放出的氨气起反应生成的点在整块板中尚能看到,其它氨基酸就别想看了.
氨基酸类的薄层鉴别过程中，显色前先将展完的板子在烘箱内烘一段时间，从而确保展开剂挥干净，效果不错
关于裂板： 1．板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是，板子要在常温下晾干后，再在烘箱中活化。如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的。 “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。” 你的板没有完全干透，表面看是干了，但是最中间的没有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，当然会炸裂了，所以应该先用低温大约40度左右烘30分钟左右，再用105度活化，就可以解决这个问题了。关于活化出现裂板、爆板的问题。我从没有遇上过。活化我是这样处理不要等到温度达到100度，而是设好温度后就将板子放在干燥箱，然后再通电加热，达到最高温度后停留5分钟左右即可。这样水分是慢慢由内而外散发，而不是由外向内散发，避免了表面成膜，里面还在散发水气，岂有不裂、不爆的道理！
关于点样：1. 点样我本人没有什么技巧，导师教了我一招挺好用，写出来大家分享，就是在点样时食指放在点样管的上端，当点样管的下端与硅胶板接触的瞬间轻轻松动上端的食指，溶液自然从点样管出来，迅速提起点样管，就这样反复操作点出的斑点既小又均匀。但要提出样品溶液不能太浓，浓度太大，点下的样品不能被硅胶很好的吸收，不利于分离。
2. 关于点样，我上学的时候，老师用比较便宜的进样器（大约10几块钱吧，10μl即可），将针尖打磨圆滑，老师好像是用锉一点一点锉的，这样点样的时候样品溶液不容易沿针尖上行（甲醇溶液都这样），并且针尖不会刺破已经铺好的薄层板。现在，我和师兄都是实行的这个办法，还是比较实用的，点样量可以精确到0.5µl。当然，点样的时候手不能抖动，动作要轻，这些要领在于意会，逐渐锻炼，相信你会体会到其中的快感。
3. 要磨平微量进样器的针尖，简单的方法就是，在展缸的盖子上轻磨（当然是靠近中间部分），就很快能解决问题，且很平滑。
以下来自http://blog.pp.cn/article.php?blog=4728008&id=617713
CMC-Na溶液的配制：  
    药典规定CMC-Na浓度为0.2％～0.5％，实际作中0.4％～0.5％最为实用；CMC-Na溶液的溶剂应用蒸馏水，以尽量减少污染。 配制CMC-Na溶液，根据实际经验一般将溶液浓度配成0.3%，需要铺厚板可配成0.5%左右，薄板可配成0.2%即可。
CMC-Na溶解最好是自然溶解（浓度不是太高），也可在水浴中加热促溶（用时还是过滤一下好，避免铺出的板子有麻坑）。
    配制CMC-Na溶液时，可以先量取好蒸馏水，再将称量好的CMC-Na均匀撒在水中，用玻璃棒搅拌，如果作的好的话可以不用加热都能溶解的很好；当溶解完全后，应该抽滤一下，这样铺的板子很均匀，不过滤会因为一些肉眼看不到的不溶物混入，这样铺的板子会出现许多小颗粒；  
    CMC-Na溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的CMC-Na可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用； 如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了，还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了。  
    在CMC-Na的溶解过程中，可以使用可进行加热作的磁力搅拌器，大概搅拌5小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清; CMC-Na后处理，很多人说是过滤，或者抽滤，我觉得可能速度很慢，而且又容易浪费。我的做法是离心，5000rpm离心20min。倒出上清液，（非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染）。更难能可贵的是，我可以收集下面没有充分溶解的CMC-Na。继续加到水中，还可以配制。  
    配制4%～5%的羧甲基纤维素（CMC）：称取CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。  
    有个办法过滤CMC-Na溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC-Na溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。  
    CMC溶液的浓度0.3-0.7% 比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞；  
    CMC-Na的溶解需要煮？？？？药检所的老师用一个大缸子装水，按比例加入CMC-Na，让他自然溶涨、溶解，临用前用漏斗，加脱脂棉，滤过即可；  CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。
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4楼2007-11-30 23:31:42
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