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求助 黄酮提取工艺研究 的步骤 方法 注意事项
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各位专家!求助 黄酮提取工艺研究 的步骤 方法 注意事项???不知哪位知道!!太感谢拉!!!!谢谢~!~!!!!!!!!!!谢谢~!~!!!!!!!!!!11 谢谢~!~!!!!!!!!!!11 谢谢~!~!!!!!!!!!!11 |
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glenn_007
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cat987123112
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glenn_007
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首先你要查找下臭灵丹中都有哪类黄酮成分。 另外臭灵丹中含有总黄酮量多少（具体方法很成熟，UV测定即可）？如果含量太低，你分的可能要辛苦一点，也没啥必要了； 如果有具体成分的结构式，看看母核中含羟基多少，然后才能设计实验步骤。 一般来说，黄酮都易溶于乙酸乙酯中，可用不同比例的乙醇跟乙酸乙酯洗脱。这是黄酮的分离，因为只有搞清楚了里面有哪类黄酮，甚至是那种黄酮成分。才能用该对照品进行含量测定。 我们做过一种二氢黄酮，水提醇沉后放置析晶，纯度就已经达到70％以上了。 然后再进一步重结晶纯化，可达到90以上。 [ Last edited by glenn_007 on 2007-12-3 at 21:08 ] |
6楼2007-12-03 21:01:16
没人做过此物质的提取,不知道它里面的含量是大约是多少?
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非常感谢 glenn_007 谢谢您的回复,很期待您在给分析一下该如何做好!最好有纯化,浓缩的最佳方式!!!深表感谢!! 没人做过此物质的提取,不知道它里面的含量是大约是多少? 我是一名在读大三学生,对此方面很感兴趣,请帮忙分析纯化,浓缩最好采用什么技术? 臭灵丹中分离和鉴定了4个黄酮醇化合物，经各种光谱数据及化学方法确定，依次为化合物喷杜素(pendultin)(l)，5一羚基一3，4’，6，7一四甲氧基一黄酮(5一hydroxy一3，4‘，6，7一tetramethoxynavone)(2)，金腰素乙(chrysosptertinB)(3)和洋艾素(artemitin)。 |
7楼2007-12-03 21:52:40
我所采用的实验过程
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浅议臭灵丹中黄酮提取工艺研究试验 【摘要】 中药臭灵丹主产于我国云南省，具有重要的药用价值。本文从臭灵丹中黄酮提取工艺研究实验出发,归纳了前人的研究技巧及方法。同时在实验的基础上提出了一些改进措施。 【关键词】 臭灵丹 黄酮提取 颜色反应 臭灵丹化学成分 臭灵丹[L aggera Pter donta(DC.)Benthj系菊科、四棱峰属植物，在云南民间作为抗菌消炎的良药，被广泛用于治疗感冒、咽喉炎、支气管炎、疟疾等。现代化学和药理研究表明臭灵丹化学成分复杂，药理活性强，有较强的抗菌消炎作用，中华人民共和国1977年《药典》及《云南药品标准》均收载臭灵丹药材。20多年来临床证明臭灵丹疗效确切，应用广泛，近年来开发出多种剂型应用于临床并且收到了较好的疗效，主要有臭灵丹注射液、臭灵丹口服液、臭灵丹颗粒剂和臭灵丹片剂、臭灵丹浸膏等。药理活性证明具有抗肿瘤活性川。为寻找其活性成分，我们对该植物的化学成分进行了研究。从云南玉溪市产臭灵丹中分离和鉴定了4个黄酮醇化合物，经各种光谱数据及化学方法确定，依次为化合物喷杜素(pendultin)(l)，5一羚基一3，4’，6，7一四甲氧基一黄酮(5一hydroxy一3，4‘，6，7一tetramethoxynavone)(2)，金腰素乙(chrysosptertinB)(3)和洋艾素(artemitin)。这4个化合物均系首次从该植物中得到。 一. 臭灵丹中黄酮提取［4］ 1.1臭灵丹中黄酮提取步骤 臭灵丹→干燥→粉碎→不同方法提取→浓缩→粗总黄酮→脱色→沉淀法纯化→大孔树脂层析→浓缩→干燥→精制黄酮 1.2黄酮含量的测定方法 总黄酮的含量测定实验原理［2］ ：采用硝酸铝比色法。黄酮类物质是以2一苯基并吡喃酮为母核的多羟基化合物，可与糖苷类物质遇碱变成明显黄色，其机制是黄酮类物质在碱性条件下其苯吡喃酮的1，2碳之间的C—O键打开成查耳酮的检测方法常用分光光度计法或液相色谱法。分光光度法以用黄酮与铝离子在碱性与亚硝酸存在条件下形成黄酮的铝络合物，生成稳定的黄色。黄色的深浅与黄酮含量呈一定的比例关系，可以芦丁(标准样)作对照，于500nm波长处比色定量测定。 1. 2 .1. 标准曲线的制备［3］:精确称取芦丁10mg,60%乙醇溶液,定溶于100ml容量瓶中,制成标准储备液。分别量取储备液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml于25ml刻度试管中,分别加入60%乙醇5ml、4ml、3ml、2ml、1ml、0ml,加入5%NaNO20 3ml,放置5min,加入10%Al(NO3)3 0.3ml,放置6min,加4%NaOH4ml后定容到10ml,放置15min后比色。 1.2 .2. 测定波长的选择:取标准储备液1ml,按标准曲线操作,在紫外分光光度计上进行全波长扫描,总黄酮反应物在506nm下有最大吸收峰。因此,确定506nm为测定波长。 1.3黄酮提取方法［3-6］： 从大量的文献来看目前较常用的提取方法有:①热水提取法、②超声波提取法、③碱液提取法、④乙酸乙酯提取法、⑤乙醇提取法、⑥甲醇提取法、⑦丙酮提取法⑧微波法。 ①热水提取法：称取粉碎的臭灵丹粉末 5.0个g;，于提取容器中加入50ml 蒸馏水，用水浴加热提取 60min，移入250ml 容量瓶中，并用蒸馏水定容；过滤，用移液管吸取20ml ，置于 100ml 容量瓶中，加 30%乙醇至刻度，吸取 10ml 置 25ml 容量瓶中，加入30%乙醇 2.50ml，再加入5%亚硝酸钠溶液0.75ml 摇匀，放置 5min,加入10%硝酸铝溶液 0.75ml，摇匀，放置 5min，再加入 1mol/l 氢氧化钠溶液 10ml，摇匀，加入 30%乙醇至刻度，放置 10min，在 510nm波长处测定吸光度。同时，取上述稀释液 10ml,置于25ml容量瓶中加入 30% 乙醇至刻度，作为对照溶液。数据见表。提取液真空浓缩，蒸馏除去粗提物中溶剂，烘干得粗提物。 ②乙醇提取法。分别称取臭灵丹粉末 5.0g，于脂肪提取器中，加入 70%乙醇（v/v 下同）50ml，用水浴加热提取 60min、120min，，测定提取率，。(提取液真空浓缩，蒸馏除去粗提物中溶剂，烘干得粗提物)。 ③碱液提取法：(2)碱液提取法[7]称取臭灵丹粉末5.0ｇ,用石油醚浸泡过夜脱脂、去色素后,将其风干,再按料液比为1∶10加Ｈ2Ｏ,用稀氢氧化钠溶液调ｐＨ值为8～9,浸泡90ｍｉｎ,过滤取上清液,滤渣重复提取2次,合并滤液,然后用稀盐酸调节ｐＨ值为4～5,静置过夜,过滤,沉淀干燥,粉碎,得黄酮粗品 ④乙酸乙酯提取法：丙酮和乙酸乙脂提取法：分别称取粉碎的臭灵丹粉末 5.0g，于脂肪提取器中，加入丙酮和乙酸乙脂50ml，用水浴加热提取 60min。 ⑤微波提取法:准确称取5份样品叶的干燥粉末5.0g至锥形瓶中,分别加入体积分数为60%的乙醇50mL,放入微波炉中,中档火力条件分别处理20、40、80、100、120s,冷却,过滤,洗涤残渣,滤液并入容量瓶,以体积分数为60%的乙醇定容到100mL。 ⑥超声波提取法：称取臭灵丹粉末各组织（根，茎，叶）5.0g，一用85%的乙醇（150ml）浸泡36小时后再用超声波提取，以频率为40Hz超声波处理30min，过滤，滤液经加热浓缩，用等量的石油醚除去不溶性的杂质，定容至于200ml。；吸取溶液1ml，按照绘制标准曲线同样的步骤和方法测定OD值。；在标准曲线上查出吸光值对应的浓度，计算不同器官中总黄酮的含量(m)。 m=VC=200C／样品质量=200C／5=40C 1.4黄酮组织鉴定［6（粗鉴定）： 臭灵丹不同组织部位→干燥→粉碎→提取→纯化→鉴定 鉴定颜色反应 ① 紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈淡黄色，在紫外光下呈淡蓝色并有荧光斑点。 ② 浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0．5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。 ③ 三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。 ④ 乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。 ⑤ 盐酸一镁粉反应：取乙醇提取液1 m1于试管中加镁粉，再加入浓的盐酸数滴(1次加入)，在泡沫处呈紫红色。 ⑥ 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇：醋酸：水=4：1：5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1％氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。 二. 臭灵丹中黄酮提取结果探讨［8］ 从相关的研究资料来看,热水提取法、超声波提取法、碱液提取法、乙酸乙酯提取法、乙醇提取法、甲醇提取法、丙酮提取法微波法等几种提取方法中微波法微波法和超声波提取法效率最高. 2.1水提取法总黄酮提取率较低，且提取液存放易腐败变质，后续的过滤等操作困难且费时，原因可能是由于极性大的水作溶剂，易把蛋白质、糖类等易溶于水的成分浸提出来，因此也易霉变。但如果直接用提取液作原料生产制剂或饮料等，因消耗溶剂的费用比其它提取法低，仍为一种可取的提取方法。 2.2丙酮、乙酸乙酯提取法克服了水提取法存放易霉变的缺点，这两种方法中乙酸乙脂提取法提取率相对水提法高出许多，且后续的过滤等操作也比较容易。这两种方法之间提取率比较：乙酸乙酯>丙酮。 2.3超声波提取法 2.4微波法 三.黄酮提取改进建议 3.1在黄酮的提取过程中不论采用何种方法,首先,要考虑好提取的影响因素.在此实验中提取的时间.PH值.提取温度.料液比等是主要的考虑因素; 3.2黄酮的纯化［9。提取的黄酮中往往还有氨基酸、多糖、色素等杂质.鉴于臭灵丹中黄酮没有可以溶于石油谜的特性,所以可以采用石油谜来除去色素和脂类物质; 3.3材料不同生长阶段所含黄酮量不同，此研究还对臭灵丹不同部位和不同生长时期的黄酮含量进行测定，以确定提取所使用的最佳材料; 3.4黄酮提取过程当中提取时间和提取温度对黄酮的好坏和提取量有决定作用，因此在提取时要随时注意提取液的颜色变化及温度的控制. |
8楼2007-12-03 21:58:28
glenn_007
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前几天出差了，所以回帖晚了。 对于一种有效部位的提取，目前不能说什么方式是最好的。只是在你的材料的研究基础上进行推测并进行改进，在实验过程中进行比较筛选。 首先你进行试验的样品量是多少呢？是做小试还是中试？ 其次你要知道，你的样品中除了黄酮还有什么其他主要化学成分。这样就好根据情况，设计如何分离纯化的方法了。你的样品的部位是根还是叶子，还是全草入药？ 对于总黄酮的检测，我们使用最多的是NaOH显色，方法很成熟，也很方便。具体可以参考一下文献，随便搜索总黄酮的含量测定方法，就会出来很多。 浓缩我们都是减压浓缩的，很麻烦也很费时间。 如有你有条件，也可以用膜分离技术。 如果你是给工厂做，要投入生产的，就不要考虑用有机溶剂提取了。要考虑环境和成本的因素。 如果是自己实验室研究用，你的protocol的方法都可以试一试。我觉得可以直接用乙酸乙酯提取，然后再用石油醚脱脂。 还有记住你的提取过程步骤越多，你的损失约严重，要尽量减少提取步骤。 |
9楼2007-12-08 11:27:32
10楼2007-12-15 19:27:08
