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nnfyw

木虫 (著名写手)

[求助] 长片段扩增的迷惑

我需要扩增的目的片段为4056bp,所采用的酶为takara LA TaqDNA E
PCR反应体系为:(50ul)
                 10*buffer         5ul
                 mgcl2               5ul(浓度为2.5um)
                 dNTP               8ul
                 模板                 2ul
                 p1                   1ul(浓度为20um)
                 p2                    1ul(浓度为20um)
                  酶                    0.5ul
                 无菌水               27.5ul
引物的退火温度和长度分别为71.6(30)和72.26(28),并且已经加上酶切位点。
PCR反应程序为:1*              94      4min
                       30*             94       30s
                                      56及60      30s
                                          72         5min
                      1*                72          10min
结果是没有扩增出来,连非特异性扩增都没有,请高手支招!

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