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nnfyw木虫 (著名写手)
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长片段扩增的迷惑
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我需要扩增的目的片段为4056bp，所采用的酶为takara LA TaqDNA E PCR反应体系为：（50ul） 10*buffer 5ul mgcl2 5ul（浓度为2.5um） dNTP 8ul 模板 2ul p1 1ul（浓度为20um） p2 1ul（浓度为20um） 酶 0.5ul 无菌水 27.5ul 引物的退火温度和长度分别为71.6(30)和72.26(28)，并且已经加上酶切位点。 PCR反应程序为：1* 94 4min 30* 94 30s 56及60 30s 72 5min 1* 72 10min 结果是没有扩增出来，连非特异性扩增都没有，请高手支招！ |
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