应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达诱导不表达
142/2返回列表上一页12
查看: 1895  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小黑L小白

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:13:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 无花草 at 2013-09-24 08:43:20
将含有构建好的表达载体的宿主菌BL21， 挑取单菌落接种于2ml的LB液体培养基，于37℃活化过夜后，按l：100稀释加入到3mlLB液体培养基中，震荡培养至OD值为0.6-0.8，加入IPTG至终浓度lmmol/L，继续于37℃摇床培养3-4 ...

1 大肠的蛋白的表达是在细胞内的，没有破壁是无法释放蛋白的，很可能你的蛋白就没有释放。
2 我是用超声破碎的。
赞一下 回复此楼
11楼2013-09-24 12:33:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qyf3931

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:13:46
感觉楼主是菌体没有破碎好，或者是上样量太少，就算重组基因不表达，菌体的蛋白还是能看见的。
赞一下 回复此楼
12楼2013-09-25 04:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoyanfei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:13:54
引用回帖:
10楼: Originally posted by 无花草 at 2013-09-24 08:46:24
我用的是6×Protein Loading Buffer。其实我有个问题没弄明白，Loading Buffer和上样buffer有没有区别？...

Loading Buffer和上样buffer没有区别, 样品处理：500ull 菌液离心收集菌体，加入1×Protein Loading Buffer  100ul，沸水浴5-10min后，10000rpm离心后，25ul 上样电泳；
赞一下 回复此楼
13楼2013-09-25 08:39:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无花草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by guoyanfei at 2013-09-25 08:39:51
Loading Buffer和上样buffer没有区别, 样品处理：500ull 菌液离心收集菌体，加入1×Protein Loading Buffer  100ul，沸水浴5-10min后，10000rpm离心后，25ul 上样电泳；...

好的，谢谢，我试试看。
赞一下 回复此楼
好好做实验，毕业找份好工作！
14楼2013-09-25 08:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 无花草 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭