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小黑L小白

新虫 (初入文坛)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 02:13:39
引用回帖:
9楼: Originally posted by 无花草 at 2013-09-24 08:43:20
将含有构建好的表达载体的宿主菌BL21, 挑取单菌落接种于2ml的LB液体培养基,于37℃活化过夜后,按l:100稀释加入到3mlLB液体培养基中,震荡培养至OD值为0.6-0.8,加入IPTG至终浓度lmmol/L,继续于37℃摇床培养3-4 ...

1 大肠的蛋白的表达是在细胞内的,没有破壁是无法释放蛋白的,很可能你的蛋白就没有释放。
2 我是用超声破碎的。
11楼2013-09-24 12:33:32
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qyf3931

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 02:13:46
感觉楼主是菌体没有破碎好,或者是上样量太少,就算重组基因不表达,菌体的蛋白还是能看见的。
12楼2013-09-25 04:42:50
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guoyanfei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 02:13:54
引用回帖:
10楼: Originally posted by 无花草 at 2013-09-24 08:46:24
我用的是6×Protein Loading Buffer。其实我有个问题没弄明白,Loading Buffer和上样buffer有没有区别?...

Loading Buffer和上样buffer没有区别, 样品处理:500ull 菌液离心收集菌体,加入1×Protein Loading Buffer  100ul,沸水浴5-10min后,10000rpm离心后,25ul 上样电泳;
13楼2013-09-25 08:39:51
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无花草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by guoyanfei at 2013-09-25 08:39:51
Loading Buffer和上样buffer没有区别, 样品处理:500ull 菌液离心收集菌体,加入1×Protein Loading Buffer  100ul,沸水浴5-10min后,10000rpm离心后,25ul 上样电泳;...

好的,谢谢,我试试看。
好好做实验,毕业找份好工作!
14楼2013-09-25 08:52:57
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