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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我目前也在做这方面的
第一,楼主的DNA是手提的吗?  呈棕黄色,楼主可以试着买一个土壤DNA提取试剂盒,不贵,提出来的DNA可以很好地做PCR,我现在真菌。、细菌的PCR结果都很单一,很好,很稳定。
第二,楼主可以试着稀释你的DNA模板,V3出现非特异性条带很正常的,细菌一般V4 V5区特异性较高,楼主可以做一个DNA模板梯度,10、50、100、200这样的梯度,我的是DNA稀释100倍后,V3区很单一。
DGGE部分我正在摸索,帮不了你。
11楼2013-09-23 09:26:32
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zq347597638 at 2013-09-23 09:26:32
我目前也在做这方面的
第一,楼主的DNA是手提的吗?  呈棕黄色,楼主可以试着买一个土壤DNA提取试剂盒,不贵,提出来的DNA可以很好地做PCR,我现在真菌。、细菌的PCR结果都很单一,很好,很稳定。
第二,楼主可以 ...

我的是用MP试剂盒提的还是棕黄色,模板也稀释了,稀释到200倍还是有非特异性条带,但是比较淡了
12楼2013-09-23 09:42:55
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-22 22:11:31
另外请楼主按照:John M.S.Bartlett and David Stirling, PCR Protocols(second Edition)-MMB-226.
仔细对照一下你的实验设计。

John M.S.Bartlett and David Stirling, PCR Protocols(second Edition)-MMB-226 ...

进不了
13楼2013-09-23 09:47:56
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by doubleping at 2013-09-22 09:45:02
DNA我也怀疑有问题就是不知道什么问题怎么办
引物多了是什么意思?
我每次做胶的时候都是从针筒的同一位置灌胶的,应该误差不会大
电压和时间是之前有跑出来,条带比较好的...

如果最后发现DNA有问题,那就重新提,用好一点的试剂盒就行~
引物多了就是反应体系中的引物过多,有时候也会有影响;
做胶的梯度都是存在误差的,所以不用梯度不用太仔细,大概就行。
14楼2013-09-24 15:37:26
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电魂

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by doubleping at 2013-09-22 21:39:30
GC buffer体系是指样品含有GC夹吗?我的引物是含有GC夹的...

GCbuffer 能够很好的打开高GC结构,使酶有效扩增。是一种PCR体系。
15楼2013-11-21 20:51:28
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