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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 虐心的PCR-DGGE
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我目前也在做这方面的
第一，楼主的DNA是手提的吗？  呈棕黄色，楼主可以试着买一个土壤DNA提取试剂盒，不贵，提出来的DNA可以很好地做PCR，我现在真菌。、细菌的PCR结果都很单一，很好，很稳定。
第二，楼主可以试着稀释你的DNA模板，V3出现非特异性条带很正常的，细菌一般V4 V5区特异性较高，楼主可以做一个DNA模板梯度，10、50、100、200这样的梯度，我的是DNA稀释100倍后，V3区很单一。
DGGE部分我正在摸索，帮不了你。
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11楼2013-09-23 09:26:32
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zq347597638 at 2013-09-23 09:26:32
我目前也在做这方面的
第一，楼主的DNA是手提的吗？  呈棕黄色，楼主可以试着买一个土壤DNA提取试剂盒，不贵，提出来的DNA可以很好地做PCR，我现在真菌。、细菌的PCR结果都很单一，很好，很稳定。
第二，楼主可以 ...

我的是用MP试剂盒提的还是棕黄色，模板也稀释了，稀释到200倍还是有非特异性条带，但是比较淡了
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12楼2013-09-23 09:42:55
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-22 22:11:31
另外请楼主按照：John M.S.Bartlett and David Stirling, PCR Protocols(second Edition)-MMB-226.
仔细对照一下你的实验设计。

John M.S.Bartlett and David Stirling, PCR Protocols(second Edition)-MMB-226 ...

进不了
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13楼2013-09-23 09:47:56
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by doubleping at 2013-09-22 09:45:02
DNA我也怀疑有问题就是不知道什么问题怎么办
引物多了是什么意思？
我每次做胶的时候都是从针筒的同一位置灌胶的，应该误差不会大
电压和时间是之前有跑出来，条带比较好的...

如果最后发现DNA有问题，那就重新提，用好一点的试剂盒就行~
引物多了就是反应体系中的引物过多，有时候也会有影响；
做胶的梯度都是存在误差的，所以不用梯度不用太仔细，大概就行。
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14楼2013-09-24 15:37:26
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电魂

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by doubleping at 2013-09-22 21:39:30
GC buffer体系是指样品含有GC夹吗？我的引物是含有GC夹的...

GCbuffer 能够很好的打开高GC结构，使酶有效扩增。是一种PCR体系。
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15楼2013-11-21 20:51:28
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