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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酶活测定
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定

试剂用量/μL           测定管          对照管          标准管          空白管
粗酶液                  30               30             0              0
硫酸铵标准液            0                0             30              0
无氨蒸馏水              2300           2300            2500           2530
天门冬酰胺                 200                 0                0                0
                      混匀，置37℃水浴30min
天门冬酰胺                   0               200                0                 0
水杨酸溶液                  1200             1200             1200             1200
次氯酸钠溶液                100              100              100              100


这个实验需要终止酶反应吗？如果需要，用什么试剂终止酶反应，为什么？
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1楼 2013-09-20 14:29:44
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助！ 2013-09-21 12:58:38
看你的设计，肯定是要终止的，要不测定管和对照管不严谨，拿出去也不会被认可。一般沸水浴就可以，不清楚你的什么酶，多查看文献看看，可以添加什么试剂。
另外，个人认为你的标准管设置不合理，要么就别要，要么提前做标准曲线。否则同样不会被认可。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wei_suzhen
2楼2013-09-21 12:23:40
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2013-09-21 12:23:40
看你的设计，肯定是要终止的，要不测定管和对照管不严谨，拿出去也不会被认可。一般沸水浴就可以，不清楚你的什么酶，多查看文献看看，可以添加什么试剂。
另外，个人认为你的标准管设置不合理，要么就别要，要么提 ...

试剂用量/μL       测定管        对照管      
粗酶液             30             30                 
硫酸铵标准液      0               0               
无氨蒸馏水       2300           2300               
天门冬酰胺         200                 0                    
                      混匀，置37℃水浴30min
天门冬酰胺         0               200                    
水杨酸溶液        1200             1200                    
次氯酸钠溶液      100              100                     
其实我的酶活是这样测定的，这个的酶在国内外没有研究的，所以不知道怎么测酶活，你所说的“沸水浴”是什么时候沸水浴？
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3楼2013-09-21 13:04:47
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)
wei_suzhen: 回帖置顶 2013-09-22 13:03:17
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2013-09-21 12:23:40
看你的设计，肯定是要终止的，要不测定管和对照管不严谨，拿出去也不会被认可。一般沸水浴就可以，不清楚你的什么酶，多查看文献看看，可以添加什么试剂。
另外，个人认为你的标准管设置不合理，要么就别要，要么提 ...

或者你有更好的设计方案吗，现在急着写论文，谢谢
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4楼2013-09-21 13:07:57
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龙小娴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般30℃酶活最佳温度的话，65℃20分钟就可以灭活
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5楼2013-09-22 10:47:01
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wei_suzhen at 2013-09-21 13:04:47
试剂用量/μL       测定管        对照管      
粗酶液             30             30                 
硫酸铵标准液      0               0               
无氨蒸馏水       2300           2300        ...

没人做那有定义么？比如多少时间降解多少（或产生多少）什么所需要的酶量是一个酶活单位？

个人认为煮沸是在酶与底物反应完后，即37度水浴后直接沸水浴使酶失活。

关于设计，个人认为你应该加一个标准管的梯度实验制定标准曲线。
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6楼2013-09-22 18:56:53
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by reallpf at 2013-09-22 18:56:53
没人做那有定义么？比如多少时间降解多少（或产生多少）什么所需要的酶量是一个酶活单位？

个人认为煮沸是在酶与底物反应完后，即37度水浴后直接沸水浴使酶失活。

关于设计，个人认为你应该加一个标准管的梯 ...

标准曲线做完了，这个测验主要是测氨的含量，貌似不能煮沸使酶失活，因为煮沸会使氨蒸发，测量就不准了，你知道测氨的方法吗
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7楼2013-09-23 19:19:41
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wei_suzhen at 2013-09-23 19:19:41
标准曲线做完了，这个测验主要是测氨的含量，貌似不能煮沸使酶失活，因为煮沸会使氨蒸发，测量就不准了，你知道测氨的方法吗...

定氮仪，不过你这可能不方便了，具体情况具体对待，得再想想好方法，要不对照没什么作用
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8楼2013-09-24 01:44:46
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