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为什么提取的胰蛋白酶没有活性?
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| 从猪胰脏中提取的胰蛋白酶原液在加如胰蛋白酶激活后,在紫外上测时,吸光值并没有明显变化,请各位高手帮忙分析一下原因,谢谢! |
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工艺过程： 提取新鲜猪胰或鲜冻羊胰，剥去脂肪和结缔组织后，用绞肉机绞碎，每10kg胰浆加0.1mol/L硫酸溶液（116ml工业硫酸，加水到20kg)20kg，搅拌1～2h后，放置过夜。次日，在不断搅拌下逐渐加入3.25kg工业硫酸铵，使硫酸铵浓度达0.3饱和度，约1h加完，待硫酸铵完全溶解后，再放置3～5h，过滤得提取液，滤液弃去 分段盐析 每10l提取液在不断搅拌下加入工业硫酸铵2.73kg，1～2h加完，使达0.7饱和度，放置过夜。次日吸去上层清液（上层清液可供提供核糖核酸酶），过滤下层沉淀，得430g滤饼。滤饼以4倍体积蒸馏水溶解，每l溶解液加176g化学纯硫酸铵使达0.3饱和度，放置3～5h后用滤纸过滤，弃去滤饼。每l滤液补加273g化学纯硫酸铵，使达0.7饱和度，放置过夜，次日减压抽干。 透析、结晶 300g滤饼加入0.4mol/LpH9.0硼酸缓冲液（49.9g硼酸溶于蒸馏水，加80ml5mol/L氢氧化钠或16g固体氢氧化钠，加蒸馏水稀释到1l，pH值达9～10，当与饱和硫酸镁混合时，pH值会降低，因此pH不必调到9.0，加蒸馏水稀释1倍，即为0.4mol/L硼酸缓冲液）200ml溶解之，过滤除去了不溶物，再加200ml“结晶透析液”透析，每24h一次“结晶透析液”，3～4天后透析袋内开始出现结晶，约一周结晶完全。 重结晶、干燥 取出透析袋，袋内结晶用布氏漏斗抽滤，约得22g胰蛋白酶结晶，按上述结晶条件重结晶一次约得18g。过滤，结晶溶于0.01mol/L盐酸（8ml盐酸加蒸馏水10l)100ml，溶解后，在0.01mol/L盐酸中透析去盐，冷冻干燥，得结晶猪胰蛋白酶注射剂原料。 过程中应该ph、温度等问题。。 |
2楼2007-11-24 23:22:10
3楼2007-11-26 17:21:02
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 388 (硕士)
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- 专业: 生物化学
4楼2007-11-26 19:25:57
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