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2269426432

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

求助:蛋白纯化的详细过程及所需试剂清单
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陌路人A

铁杆木虫 (知名作家)

一粟 ▪ 陌路

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
2269426432(河边的芦苇代发): 金币+1, 有帮助 2013-09-12 08:31:35
1.等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2.盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。
3.有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。


要是再详细建议去查阅专业文献
愿心,随风而舞~~~
3楼2013-09-11 20:27:47
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purRRRRRRRRR

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过柱子纯化 蛋白上的也想要载体离子 与柱子结合 需要裂解液 冲洗液 洗脱液
4楼2013-09-12 15:38:33
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2269426432

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物小混混 at 2013-09-11 15:18:42
蛋白啥性质?

GST蛋白,包涵体
5楼2013-09-13 09:43:39
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wushm388

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2269426432 at 2013-09-13 09:43:39
GST蛋白,包涵体

是GST融合蛋白吗?怎么还是包涵体呢,那加GST标签就没有意义了,反而增加了包涵体复性的难度。建议设法使目的蛋白可溶表达,或去掉GST后表达包涵体。
6楼2013-09-13 13:37:19
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