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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量PCR，但扩增曲线没有平台期！！
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pksq100056

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 大海一孤舟 at 2013-09-13 17:15:30
从扩增曲线看，很有可能是用探针做的，探针设计不合理的有可能出现这种情况。如果是探针，可检查探针问题。

我用的是荧光染料，没用探针的
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11楼2013-09-14 08:24:56
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pksq100056

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by beyond0551 at 2013-09-13 10:30:48
底物过量，无S型扩展曲线，建议再做一次吧

我用不同基因做了几次，都是这样……
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12楼2013-09-14 08:25:42
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
引用回帖:
10楼: Originally posted by pksq100056 at 2013-09-14 08:24:18
我引物上下游加起来一共是1ul，总体积是20ul，多吗？...

额...这个嘛~~引物量有的时候不是看体积，而是看浓度，你稀释引物的时候稀释到什么浓度了？一般是10uM，20uL体系上下游引物各取0.5uL。
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13楼2013-09-16 16:10:14
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pksq100056

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by holyala at 2013-09-16 16:10:14
额...这个嘛~~引物量有的时候不是看体积，而是看浓度，你稀释引物的时候稀释到什么浓度了？一般是10uM，20uL体系上下游引物各取0.5uL。...

是的，我也是10uM的
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14楼2013-09-16 16:27:26
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xv1215

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by pksq100056 at 2013-09-14 08:24:18
我引物上下游加起来一共是1ul，总体积是20ul，多吗？...

1微升引物貌似不多多

[ 发自小木虫客户端 ]
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15楼2013-09-16 18:29:38
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lyy5215211

新虫 (初入文坛)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-05-12 18:06:27
我现在也遇到这种情况
熔解曲线很好  扩增曲线不好
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16楼2014-05-12 17:27:03
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violetice

银虫 (小有名气)
也遇到同样的问题，不过我用的是探针，引物用SYBR GREEN试过，是好的。原因还是探针结合的不好。
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17楼2014-07-03 14:01:55
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御风而翔

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xv1215 at 2013-09-16 18:29:38
1微升引物貌似不多多
...

对啊，我的也是，这种情况该怎么办呢
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18楼2014-08-06 10:39:13
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引物、dNTP多了吧，停不下来。Ct的位置没什么问题。
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19楼2014-08-06 15:52:23
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xzxcy

新虫 (初入文坛)
你好，请问问题解决了吗？我今天也遇到跟楼主同样的问题，求帮助？
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20楼2016-03-03 22:17:29
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