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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提RNA的技术问题以及改进的建议
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hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-04 18:26:33
不是吧，trizol应该基因组dna去的很彻底啊。。。我买的是invitrogen公司的，100ml650元，效果还可以。。。当时提的是植物根部组织，糖类酚类物质较多，改进了下trizol，效果不错还实惠。。。你提的是什么组织？...

我提的是植物的叶子，我用的天根的提取液，对于多糖多酚的根是没问题的，也没有基因组污染。就是叶子的不行，降低了样品的量，可还是有点降解和基因组污染，所以很困惑为什么根的RNA没问题，叶子的问题反而比较大？
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11楼2013-09-05 09:16:46
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随波逐刘

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-05 14:34:42
引用回帖:
11楼: Originally posted by hellohuo at 2013-09-05 09:16:46
我提的是植物的叶子，我用的天根的提取液，对于多糖多酚的根是没问题的，也没有基因组污染。就是叶子的不行，降低了样品的量，可还是有点降解和基因组污染，所以很困惑为什么根的RNA没问题，叶子的问题反而比较大？...

有用过其他方法吗？我用CTAB法提过叶子的，还挺好的！
CTAB-LiCl沉淀法提取RNA
1. 将2×CTAB 提取液于65℃水浴锅中预热。取0.1-0.2g样品于液氮中研磨成粉末
2. 转入2ml离心管中，加700ul提取液，同时加20ulβ-巯基乙醇
3. 剧烈振荡混匀，65℃水浴10 min，期间振荡数次
4. 冷却到室温，加等体积氯仿:异戊醇(24:1)，充分振荡，冰浴10min
5. 4℃，12000g，离心10 min
6. 取上清至新2ml离心管，重复上述步骤，再抽提1次
7. 取上清于1.5ml离心管中，加入1/4体积的10 mol/L LiCl溶液
8. 4℃条件下过夜，或-20℃下放置6 h 以上，使RNA 沉淀
9. 4℃，12000g，离心20 min，弃上清，获粗提的总RNA 沉淀
10. 用500ul ddH2O溶解，加等体积氯仿/异戊醇（24:1）再抽提1次
11. 4℃，12000g，离心10min
12. 取上清，加1/10体积3mol/LNaAc（PH5.2），混匀后，加等体积预冷的异丙醇，-20℃沉淀2-3h
13. 4℃，12000g，离心10min，弃上清，用75%乙醇洗沉淀2次
14. 短暂离心吸出多余液体，室温干燥，ddH2O溶解，-80℃保存
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12楼2013-09-05 14:06:00
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hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-05 14:06:00
有用过其他方法吗？我用CTAB法提过叶子的，还挺好的！
CTAB-LiCl沉淀法提取RNA
1. 将2×CTAB 提取液于65℃水浴锅中预热。取0.1-0.2g样品于液氮中研磨成粉末
2. 转入2ml离心管中，加700ul提取液，同时加20ulβ-巯 ...

恩，我试试这个方法，谢谢啦~~
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13楼2013-09-09 11:55:49
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biology-boy

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
14楼2013-09-09 12:35:26
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hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by biology-boy at 2013-09-09 12:35:26
天根的 对高精密的实验 不是很好用哦。

那请问一下，用哪家公司的比较好？多酚多糖的
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15楼2013-09-09 15:41:21
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