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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-04 18:26:33
不是吧,trizol应该基因组dna去的很彻底啊。。。我买的是invitrogen公司的,100ml650元,效果还可以。。。当时提的是植物根部组织,糖类酚类物质较多,改进了下trizol,效果不错还实惠。。。你提的是什么组织?...

我提的是植物的叶子,我用的天根的提取液,对于多糖多酚的根是没问题的,也没有基因组污染。就是叶子的不行,降低了样品的量,可还是有点降解和基因组污染,所以很困惑为什么根的RNA没问题,叶子的问题反而比较大?
11楼2013-09-05 09:16:46
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-05 14:34:42
引用回帖:
11楼: Originally posted by hellohuo at 2013-09-05 09:16:46
我提的是植物的叶子,我用的天根的提取液,对于多糖多酚的根是没问题的,也没有基因组污染。就是叶子的不行,降低了样品的量,可还是有点降解和基因组污染,所以很困惑为什么根的RNA没问题,叶子的问题反而比较大?...

有用过其他方法吗?我用CTAB法提过叶子的,还挺好的!
CTAB-LiCl沉淀法提取RNA
1. 将2×CTAB 提取液于65℃水浴锅中预热。取0.1-0.2g样品于液氮中研磨成粉末
2. 转入2ml离心管中,加700ul提取液,同时加20ulβ-巯基乙醇
3. 剧烈振荡混匀,65℃水浴10 min,期间振荡数次
4. 冷却到室温,加等体积氯仿:异戊醇(24:1),充分振荡,冰浴10min
5. 4℃,12000g,离心10 min
6. 取上清至新2ml离心管,重复上述步骤,再抽提1次
7. 取上清于1.5ml离心管中,加入1/4体积的10 mol/L LiCl溶液
8. 4℃条件下过夜,或-20℃下放置6 h 以上,使RNA 沉淀
9. 4℃,12000g,离心20 min,弃上清,获粗提的总RNA 沉淀
10. 用500ul ddH2O溶解,加等体积氯仿/异戊醇(24:1)再抽提1次
11. 4℃,12000g,离心10min
12. 取上清,加1/10体积3mol/LNaAc(PH5.2),混匀后,加等体积预冷的异丙醇,-20℃沉淀2-3h
13. 4℃,12000g,离心10min,弃上清,用75%乙醇洗沉淀2次
14. 短暂离心吸出多余液体,室温干燥,ddH2O溶解,-80℃保存
12楼2013-09-05 14:06:00
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-05 14:06:00
有用过其他方法吗?我用CTAB法提过叶子的,还挺好的!
CTAB-LiCl沉淀法提取RNA
1. 将2×CTAB 提取液于65℃水浴锅中预热。取0.1-0.2g样品于液氮中研磨成粉末
2. 转入2ml离心管中,加700ul提取液,同时加20ulβ-巯 ...

恩,我试试这个方法,谢谢啦~~
13楼2013-09-09 11:55:49
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biology-boy

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

14楼2013-09-09 12:35:26
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by biology-boy at 2013-09-09 12:35:26
天根的 对高精密的实验 不是很好用哦。

那请问一下,用哪家公司的比较好?多酚多糖的
15楼2013-09-09 15:41:21
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