求助～花粉管荧光实验～ - 动植物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2013-09-05 10:28:22

grape_vine

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10楼: Originally posted by 盐爪爪 at 2013-09-05 09:06:44
是怎样透明呢？我就直接染色之后观察，后来发现有时候遍地是荧光就漂洗一下。。。...

方法和试剂

母液
1.    冰醋酸
2.    乙醇
3.    1M NaOH (氢氧化钠)
4.    100ml 1M K2HPO4 （磷酸氢二钾）
5.    100ml 1M KH2PO4 （磷酸二氢钾）
6.    苯胺蓝 (Fisher)
7.    甘油
工作溶液
1.    冰醋酸含量为10% 的乙醇溶液 (固定组织使用)
2.    50 mM 偏磷酸钾溶液: 4.17ml 1M 磷酸氢二钾 + 0.83 ml 1M 磷酸二氢钾 + 995 ml水, pH 7.5
3.    苯胺蓝含量为0.01% 的KPO4 溶液 (染色)
4.    11.含有50%甘油的偏磷酸钾溶液(封固剂)

仪器

1.    紫外显微镜

步骤

1.    在1.5ml离心管里加入250μl冰醋酸，将雄蕊浸泡到冰醋酸里至少固定1.5小时。如果需要可将组织过夜固定。
2.    将固定完的组织浸泡在1M氢氧化钠溶液里过夜处理，是组织软化。
3.    用偏磷酸钾洗植物组织三次.  (在这个阶段植物组织是易碎的)
4.    用200μl苯胺蓝对组织进行染色5-10分钟或者最久可以染色10小时。
5.    染色后，将组织放置到载玻片上在紫外显微镜下观察。如有需要可以压片观察。

参考文献

1.       Modified from the online protocol on Dr. Daphne Preusss’s lab (Univ of Chicago).
2.       Lu Y., Chanroj S., Zulkifli L., Johnson M.A., Uozumi N., Cheung A., Sze H. (2011). Pollen tubes lacking a pair of K+ transporters fail to target ovules in Arabidopsis. Plant Cell 23(1): 81-93.

12楼2013-09-05 15:39:45

盐爪爪

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引用回帖:

12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-09-05 15:39:45
方法和试剂

母液
1.    冰醋酸
2.    乙醇
3.    1M NaOH (氢氧化钠)
4.    100ml 1M K2HPO4 （磷酸氢二钾）
5.    100ml 1M KH2PO4 （磷酸二氢钾）
6.    苯胺蓝 (Fisher)
7.    ...

好详细，真是谢谢您~
不过它上面的这个步骤也是苯胺蓝染色然后压片观察呢，我们学校木有免费的外文的数据库（汗一个）就只是看的中文的文献，也都只说的染色压片，比较笼统。
想来还是做草花好，温室一养一批，木本可倒好，今年不成功就得等明年，明年不成功后年就毕业了。。。

13楼2013-09-05 16:41:39

grape_vine

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引用回帖:

13楼: Originally posted by 盐爪爪 at 2013-09-05 16:41:39
好详细，真是谢谢您~
不过它上面的这个步骤也是苯胺蓝染色然后压片观察呢，我们学校木有免费的外文的数据库（汗一个）就只是看的中文的文献，也都只说的染色压片，比较笼统。
想来还是做草花好，温室一养一批，木 ...

别阿,赶紧加油做!

14楼2013-09-05 16:42:36