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求助～花粉管荧光实验～已有8人参与
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做着花粉管荧光观察的实验，是远缘杂交，效果总是不理想，花粉管的总是生长不到花柱里面去，但是做的组合是可以得到种子的，按理来说应该可以观察到的。 还有总是能看到一些非常明亮的组织，像下面图片那样，麻烦问问这是花粉管么？特别是前两张看着不像啊。。。 另外看文献上的图片都好美好，但是自己拍的就有各种乱七八糟的背景。。。   ｚａｎｇ24h (23).jpg  自交72 (3).jpg  ｚｉ24h (34).jpg [ Last edited by 盐爪爪 on 2013-8-26 at 10:28 ] |
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方法和试剂 母液 1. 冰醋酸 2. 乙醇 3. 1M NaOH (氢氧化钠) 4. 100ml 1M K2HPO4 （磷酸氢二钾） 5. 100ml 1M KH2PO4 （磷酸二氢钾） 6. 苯胺蓝 (Fisher) 7. 甘油 工作溶液 1. 冰醋酸含量为10% 的乙醇溶液 (固定组织使用) 2. 50 mM 偏磷酸钾溶液: 4.17ml 1M 磷酸氢二钾 + 0.83 ml 1M 磷酸二氢钾 + 995 ml水, pH 7.5 3. 苯胺蓝含量为0.01% 的KPO4 溶液 (染色) 4. 11.含有50%甘油的偏磷酸钾溶液(封固剂) 仪器 1. 紫外显微镜 步骤 1. 在1.5ml离心管里加入250μl冰醋酸，将雄蕊浸泡到冰醋酸里至少固定1.5小时。如果需要可将组织过夜固定。 2. 将固定完的组织浸泡在1M氢氧化钠溶液里过夜处理，是组织软化。 3. 用偏磷酸钾洗植物组织三次. (在这个阶段植物组织是易碎的) 4. 用200μl苯胺蓝对组织进行染色5-10分钟或者最久可以染色10小时。 5. 染色后，将组织放置到载玻片上在紫外显微镜下观察。如有需要可以压片观察。 参考文献 1. Modified from the online protocol on Dr. Daphne Preusss’s lab (Univ of Chicago). 2. Lu Y., Chanroj S., Zulkifli L., Johnson M.A., Uozumi N., Cheung A., Sze H. (2011). Pollen tubes lacking a pair of K+ transporters fail to target ovules in Arabidopsis. Plant Cell 23(1): 81-93. |
12楼2013-09-05 15:39:45
![\"求助～花粉管荧光实验～-3\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2013/0826/w133h2546297_1377483832_559.jpg#opennewwindow\")
2楼2013-08-26 10:24:18
3楼2013-08-26 20:03:25
4楼2013-08-28 22:23:24