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wst258

金虫 (小有名气)

给你个简单的方法
培养好的菌,取1.5ml到eppendorf管中,12000离心两分钟,弃上清,再用100ul水垂悬沉淀,100度水浴5min。12000离心1min。上清即可为模板。
不妨试试去。
11楼2007-11-15 21:18:50
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xuanyuejia

金虫 (小有名气)

我想问下你的蛋白酶K是怎么配的~
12楼2007-11-15 21:29:41
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jevon

我也做过提取,但是想的还没有很深!当时做的是总DNA的提取,这次我学习了,回去好好学!
13楼2007-11-16 01:08:22
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tdwinner

木虫 (正式写手)

确定步骤都正确么

[ Last edited by tdwinner on 2007-11-16 at 08:58 ]
14楼2007-11-16 08:57:10
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

LZ,我也碰到和你同样的问题了,我也是用的和你同样的方法,不过一开始只培养3ml菌液,犯不着小量提取还培养那么多!我也是做到第六步,刚加入异丙醇的时候可以看到沉淀,颠倒混匀一次到两次还可以看到有些丝状的沉淀,但是继续颠倒混匀,沉淀消失了!
请高手指教,本人不胜感激!!!!!!!!
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15楼2007-11-16 09:35:17
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

补充一句,我提细菌的基因组DNA不是用于PCR,而是用于构建基因组文库!

另外,哪位虫子有更好的提取细菌基因组DNA的方法,比如用试剂盒什么的,请告知!非常感谢!
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16楼2007-11-16 09:39:53
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gyl828

木虫 (著名写手)

某的跟班背影。。。

看看

[ Last edited by gyl828 on 2007-11-16 at 09:54 ]
17楼2007-11-16 09:49:15
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bbzhangzhang

金虫 (正式写手)

一个超级高手经常提醒我,抽提,一定首先把菌或细胞器充分裂解!

我个人强烈建议你在适当的裂解步骤加上剧烈涡旋2min,其他步骤暂时不变,相信会有作用

另外我查了
“CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,可以从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里,在高离子强度的溶液里,CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。因此,CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌(包括E.coli的某些株)中制备纯化DNA ”

你看盐离子浓度是否合乎CTAB结合与分离核酸的要求,再做调整

祝好运!
☆沮丧时,我引吭高歌;悲伤时,我开怀大笑;☆病痛时,我加倍工作;恐惧时,我勇往直前;☆自卑时,我换上新装;不安时,我提高嗓音
18楼2007-11-16 10:57:37
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syyou

金虫 (小有名气)

步骤没有原则上的问题。应该是操作或试剂的问题。还有有时候DNA的量少的话是看不出来的,建议跑下电泳验证。
19楼2007-11-16 11:22:34
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yaoyl0679

金虫 (正式写手)

关于红球菌基因组的提取方法改进

红球菌属于阳性菌,有着很厚的细胞壁,基因组提取是比较困难的,我自己是做红球菌的,因此摸索了一个方法,比较费时但是提取得效果很好,一般都是一条条带,我的方法是在你的步骤之前加一步融菌酶处理,处理时间为37下2h或者更长,其它你可照你自己的方法做下去。
20楼2007-11-16 11:49:09
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