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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌基因组DNA为什么提不出来？
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wst258

金虫 (小有名气)
给你个简单的方法
培养好的菌，取1.5ml到eppendorf管中，12000离心两分钟，弃上清，再用100ul水垂悬沉淀，100度水浴5min。12000离心1min。上清即可为模板。
不妨试试去。
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11楼2007-11-15 21:18:50
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xuanyuejia

金虫 (小有名气)
我想问下你的蛋白酶K是怎么配的~
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12楼2007-11-15 21:29:41
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jevon

我也做过提取，但是想的还没有很深！当时做的是总ＤＮＡ的提取，这次我学习了，回去好好学！
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13楼2007-11-16 01:08:22
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tdwinner

木虫 (正式写手)
确定步骤都正确么

[ Last edited by tdwinner on 2007-11-16 at 08:58 ]
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14楼2007-11-16 08:57:10
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
LZ,我也碰到和你同样的问题了，我也是用的和你同样的方法，不过一开始只培养3ml菌液，犯不着小量提取还培养那么多！我也是做到第六步，刚加入异丙醇的时候可以看到沉淀，颠倒混匀一次到两次还可以看到有些丝状的沉淀，但是继续颠倒混匀，沉淀消失了！
请高手指教，本人不胜感激！！！！！！！！
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15楼2007-11-16 09:35:17
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
补充一句，我提细菌的基因组DNA不是用于PCR，而是用于构建基因组文库！

另外，哪位虫子有更好的提取细菌基因组DNA的方法，比如用试剂盒什么的，请告知！非常感谢！
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16楼2007-11-16 09:39:53
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gyl828

木虫 (著名写手)

某的跟班背影。。。
看看

[ Last edited by gyl828 on 2007-11-16 at 09:54 ]
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17楼2007-11-16 09:49:15
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bbzhangzhang

金虫 (正式写手)
一个超级高手经常提醒我，抽提，一定首先把菌或细胞器充分裂解！

我个人强烈建议你在适当的裂解步骤加上剧烈涡旋2min，其他步骤暂时不变，相信会有作用

另外我查了
“CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，可以从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA ”

你看盐离子浓度是否合乎CTAB结合与分离核酸的要求，再做调整

祝好运！
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☆沮丧时，我引吭高歌；悲伤时，我开怀大笑;☆病痛时，我加倍工作；恐惧时，我勇往直前;☆自卑时，我换上新装；不安时，我提高嗓音
18楼2007-11-16 10:57:37
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syyou

金虫 (小有名气)
步骤没有原则上的问题。应该是操作或试剂的问题。还有有时候DNA的量少的话是看不出来的，建议跑下电泳验证。
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19楼2007-11-16 11:22:34
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yaoyl0679

金虫 (正式写手)

关于红球菌基因组的提取方法改进

红球菌属于阳性菌，有着很厚的细胞壁，基因组提取是比较困难的，我自己是做红球菌的，因此摸索了一个方法，比较费时但是提取得效果很好，一般都是一条条带，我的方法是在你的步骤之前加一步融菌酶处理，处理时间为37下2h或者更长，其它你可照你自己的方法做下去。
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20楼2007-11-16 11:49:09
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