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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-08-18 09:41:09
BSA我加的终浓度是1mg/ml,低一点应该也可以的,文献中用0.2mg/ml的比较多,真菌确实没细菌那么好P,选择的引物和模板的质量都很重要!...

细菌的好P,何以见得?
现在做鉴定,包括细菌、放线菌、真菌,细菌还没做,放线菌菌壁难破,提DNA效果不好,细菌还没开始,真菌用石英砂研磨,有些真菌菌丝较长,比较好刮取,大量产孢子的哪些,用石英砂研磨效果不好,刮取基内菌丝,肯定会带上培养基,提取得到dna 杂质多,液氮现在买不到,要得到好质量的DNA ,你是怎么处理的?
11楼2013-08-18 11:04:22
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-18 11:04:22
细菌的好P,何以见得?
现在做鉴定,包括细菌、放线菌、真菌,细菌还没做,放线菌菌壁难破,提DNA效果不好,细菌还没开始,真菌用石英砂研磨,有些真菌菌丝较长,比较好刮取,大量产孢子的哪些,用石英砂研磨效果不 ...

细菌我们P过,电泳条带有明显降解的DNA都P出来了,真菌就不行了,我们提取的是土壤的DNA,用的是试剂盒(FastDNA SPIN Kit),很方便很快的,就是价格有些贵,还需要配有专门的仪器,你是培养的真菌不知道能不能用这个试剂盒,这个试剂盒好像主要是针对土壤的

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12楼2013-08-18 15:34:52
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-08-18 15:34:52
细菌我们P过,电泳条带有明显降解的DNA都P出来了,真菌就不行了,我们提取的是土壤的DNA,用的是试剂盒(FastDNA SPIN Kit),很方便很快的,就是价格有些贵,还需要配有专门的仪器,你是培养的真菌不知道能不能用 ...

谢谢
13楼2013-08-19 00:13:03
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淘淘279

铜虫 (小有名气)

引物设计是否合理?
引物的量有点少
dNTP量有点少
你能做的永远不止这些!
14楼2013-10-22 20:23:32
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熊拉拉

新虫 (小有名气)

退火温度多筛选一下,还有一点你的引物确保是没有问题的吧?我曾今直接用文献上的引物,结果引物有问题折腾了好久
15楼2013-12-26 10:54:36
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