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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跑PCR，琼脂糖电泳没有条带出现
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美丽的家园

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-08-18 09:41:09
BSA我加的终浓度是1mg/ml，低一点应该也可以的，文献中用0.2mg/ml的比较多，真菌确实没细菌那么好P，选择的引物和模板的质量都很重要！...

细菌的好P,何以见得?
现在做鉴定，包括细菌、放线菌、真菌，细菌还没做，放线菌菌壁难破，提DNA效果不好，细菌还没开始，真菌用石英砂研磨，有些真菌菌丝较长，比较好刮取，大量产孢子的哪些，用石英砂研磨效果不好，刮取基内菌丝，肯定会带上培养基，提取得到dna 杂质多，液氮现在买不到，要得到好质量的DNA ，你是怎么处理的?
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11楼2013-08-18 11:04:22
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-18 11:04:22
细菌的好P,何以见得?
现在做鉴定，包括细菌、放线菌、真菌，细菌还没做，放线菌菌壁难破，提DNA效果不好，细菌还没开始，真菌用石英砂研磨，有些真菌菌丝较长，比较好刮取，大量产孢子的哪些，用石英砂研磨效果不 ...

细菌我们P过，电泳条带有明显降解的DNA都P出来了，真菌就不行了，我们提取的是土壤的DNA，用的是试剂盒（FastDNA SPIN Kit），很方便很快的，就是价格有些贵，还需要配有专门的仪器，你是培养的真菌不知道能不能用这个试剂盒，这个试剂盒好像主要是针对土壤的
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

美丽的家园
12楼2013-08-18 15:34:52
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美丽的家园

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-08-18 15:34:52
细菌我们P过，电泳条带有明显降解的DNA都P出来了，真菌就不行了，我们提取的是土壤的DNA，用的是试剂盒（FastDNA SPIN Kit），很方便很快的，就是价格有些贵，还需要配有专门的仪器，你是培养的真菌不知道能不能用 ...

谢谢
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13楼2013-08-19 00:13:03
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淘淘279

铜虫 (小有名气)
引物设计是否合理？
引物的量有点少
dNTP量有点少
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你能做的永远不止这些！
14楼2013-10-22 20:23:32
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熊拉拉

新虫 (小有名气)
退火温度多筛选一下，还有一点你的引物确保是没有问题的吧？我曾今直接用文献上的引物，结果引物有问题折腾了好久
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15楼2013-12-26 10:54:36
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