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紫苜蓿dhp

银虫 (小有名气)

[求助] 准备做sephadex G50,脑袋模糊中。。。。。

准备做葡聚糖凝胶色谱分离酶解多肽,老板说目的物的分子量大概是1000-3000的,买的是sephadexG50。对于柱子的选择(长度、直径)以及填柱体积等不懂,麻烦各位有经验的虫友教教我~~~实验室没有一个师兄师姐做过这种实验,且带我的老板也长期不在,无奈与痛苦中。。。。。
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

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★ ★ ★
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紫苜蓿dhp: 金币+3, 有帮助 2013-08-15 16:57:39
G50吸水量为5ml/g,一般会多加很多去离子水,让其自然沉降
我用过这个,之前实验室有人用,柱子为长凝胶柱

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-08-15 15:27:37
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紫苜蓿dhp

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2013-08-15 15:27:37
G50吸水量为5ml/g,一般会多加很多去离子水,让其自然沉降
我用过这个,之前实验室有人用,柱子为长凝胶柱

实验室的柱子都是直径2.6的,一根是长40cm,还有一根60cm的。意思是我要选用长的这一根吧?是不是要把整个柱子都装满葡聚糖凝胶呢?
3楼2013-08-15 16:59:19
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
紫苜蓿dhp: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2013-08-17 15:14:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by 紫苜蓿dhp at 2013-08-15 16:59:19
实验室的柱子都是直径2.6的,一根是长40cm,还有一根60cm的。意思是我要选用长的这一根吧?是不是要把整个柱子都装满葡聚糖凝胶呢?...

最好是多沉降,
你是先粗分么?如果是粗分的话可以选择40,上面适当空隙,方便加样和加溶剂就行
4楼2013-08-16 09:11:46
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紫苜蓿dhp

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zinfly at 2013-08-16 09:11:46
最好是多沉降,
你是先粗分么?如果是粗分的话可以选择40,上面适当空隙,方便加样和加溶剂就行...

嗯就是酶解以后的多肽混合物
5楼2013-08-16 10:10:33
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
葡聚糖凝胶使用说明、理化性质和分离范围
http://www.yaodongxue.cn/Article/ShowArticle.asp?ArticleID=1650
6楼2013-08-16 10:42:49
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hujiasong

铜虫 (著名写手)


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★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
紫苜蓿dhp: 金币+4, ★★★很有帮助, 看来是有经验的虫友啊,十分感谢!以后还要向您请教~~ 2013-08-17 15:17:19
直接用水将凝胶泡开,然后放在冰箱里面。将柱子架好,然后将胶上面的水稍微去掉一点,尽量整体的均匀倒入柱子中,最好一次性的加入不要有气泡,可以用玻璃棒引流进去,一直保持着是均匀的状态加入就可以了。

    测量的时候先调节好流速,尽量每个试管搜集的样品够你的分光光度计测量,然后只需将你的样品放里面(提前将上面的水吸干,浓度我们的是蛋白4-10mg/ml)开启自动收集器,等待一定时间测量就行了,然后测吸光度就可以啦。这个当你做了以后你会发现很简单,但是洗试管比较麻烦,努力吧!
7楼2013-08-16 17:08:19
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