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电镜前处理方法
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要用电镜看水稻叶片的硅细胞，可是样品怎么处理呢？要做切片吧？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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【答案】应助回帖
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透射电镜样品的制备（以小麦为例，参照张宏昌硕士论文《小麦新抗源一粒葡抗条锈病的组织学和超微结构研究》） 采样： 接种小麦叶片透射电镜样品的加工处理按康 [58] 介绍的方法进行。接种后 7 d、9 d 时取样，将叶片切成 0.1 cm×0.2 cm 小块，放入 4%的戊二醛中抽真空。 制样过程： 将采集的叶样抽真空后固定于 4%的戊二醛 3～14h 后，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲 洗 4 次，每次 15～20min。之后用 1%的锇酸后固定叶样 2h。磷酸缓冲液冲洗 4 次，每 次 15～20min。配制 30%、50%、70%、80%、90%和 100%乙醇溶液，依次对叶样进行 脱水，每一等级时间为 30min，100%乙醇溶液脱水 3 次。用渗透剂和包埋剂（LR-White 树胶）进行渗透包埋，渗透剂Ⅰ1.5 h、渗透剂Ⅱ3.5 h、渗透剂Ⅲ5 h，纯包埋剂 12～24h。 然后将样品进行包埋，于 60℃下聚合 48h，取出样品块，置于干燥皿内保存。 渗透剂组成配比为：包埋剂 : 乙醇（Ⅰ1 : 3；Ⅱ1 : 1；Ⅲ3 : 1） 切片、染色、观察： 将修整好的样品包被块固定在切片机上，用钻石刀进行切片。将选好的切片捞于铜 网上。后将其置于 2%的醋酸双氧铀中染色 10min，再用 2%柠檬酸铅染色 5min，用蒸 馏水洗净，置于滤纸上自然干燥后，在 JEOL-1230 型透射电镜下进行观察。 |
liyuan07211楼2013-08-21 21:42:06
2楼2013-08-14 16:47:26
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