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liyuan072

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 电镜前处理方法

要用电镜看水稻叶片的硅细胞，可是样品怎么处理呢？要做切片吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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1楼 2013-08-14 13:09:01

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草溪河

铁虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

透射电镜样品的制备（以小麦为例，参照张宏昌硕士论文《小麦新抗源一粒葡抗条锈病的组织学和超微结构研究》）
采样：
接种小麦叶片透射电镜样品的加工处理按康
[58]
介绍的方法进行。接种后 7 d、9 d
时取样，将叶片切成 0.1 cm×0.2 cm 小块，放入 4%的戊二醛中抽真空。
制样过程：
将采集的叶样抽真空后固定于 4%的戊二醛 3～14h 后，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲
洗 4 次，每次 15～20min。之后用 1%的锇酸后固定叶样 2h。磷酸缓冲液冲洗 4 次，每
次 15～20min。配制 30%、50%、70%、80%、90%和 100%乙醇溶液，依次对叶样进行
脱水，每一等级时间为 30min，100%乙醇溶液脱水 3 次。用渗透剂和包埋剂（LR-White
树胶）进行渗透包埋，渗透剂Ⅰ1.5 h、渗透剂Ⅱ3.5 h、渗透剂Ⅲ5 h，纯包埋剂 12～24h。
然后将样品进行包埋，于 60℃下聚合 48h，取出样品块，置于干燥皿内保存。
渗透剂组成配比为：包埋剂 : 乙醇（Ⅰ1 : 3；Ⅱ1 : 1；Ⅲ3 : 1）
切片、染色、观察：
将修整好的样品包被块固定在切片机上，用钻石刀进行切片。将选好的切片捞于铜
网上。后将其置于 2%的醋酸双氧铀中染色 10min，再用 2%柠檬酸铅染色 5min，用蒸
馏水洗净，置于滤纸上自然干燥后，在 JEOL-1230 型透射电镜下进行观察。