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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多次煮冻或离心会影响蛋白的含量？
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佩琪

新虫 (初入文坛)

[求助] 多次煮冻或离心会影响蛋白的含量？

蛋白提取完后放-80℃保存，第二天拿出来在95℃条件下煮了5分钟，然后5000rpm离心1min跑SDS-PAGE胶做western后又放回-80℃，第三天再拿出来同样条件处理跑胶做western，结果发现同一个样品中待检测的两个目的蛋白之间的比例发生了变化，这是什么原因呢？难道多次煮冻或离心会影响蛋白的含量？望各位大侠多多指教，小女子不胜感激……
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1楼 2013-08-10 20:30:58
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-10 23:43:49
佩琪: 金币+3, ★有帮助, 给我一个很好的提醒 2013-08-11 10:33:53
反复冻融对蛋白结构影响很大是肯定的，但如果仅仅多一次冻融就出现了明显变化的话，就有点诡异了，但也不能排除你的蛋白对冻融特别敏感！建议以后还是分装一下，以避免这个问题。同时呢，你自己可以做个试验，冻融一次，二次，三次，看看结果如何！Good luck！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

佩琪
互助互励，共奋共进！！
2楼2013-08-10 21:27:30
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蔓海劫天

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-10 23:43:57
我也正在做这一方面内容，尽量不要反复冻融咯，建议分开保存取用！
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3楼2013-08-10 21:46:42
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飞行鸟

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-10 23:44:04
反复冻融当然会对蛋白结构影响很大呀。
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快乐吧
4楼2013-08-10 23:35:07
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佩琪

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-10 21:27:30
反复冻融对蛋白结构影响很大是肯定的，但如果仅仅多一次冻融就出现了明显变化的话，就有点诡异了，但也不能排除你的蛋白对冻融特别敏感！建议以后还是分装一下，以避免这个问题。同时呢，你自己可以做个试验，冻融一 ...

谢谢，我会好好考虑一下的~
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5楼2013-08-11 10:30:15
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佩琪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蔓海劫天 at 2013-08-10 21:46:42
我也正在做这一方面内容，尽量不要反复冻融咯，建议分开保存取用！

非常感谢你的建议~
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6楼2013-08-11 10:32:04
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尽量避免反复冻融，短时间在4℃是没什么问题的
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自主创业者，捣腾生物试剂
7楼2013-08-11 10:54:18
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