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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教小鼠大脑解剖分离步骤
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iwish297

禁虫 (小有名气)
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1楼 2013-08-08 18:28:15
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晨光逐鹿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取下脑组织后常规酒精脱水：标本先依次置于70 %, 80%各12 h(时间稍微长些影响不大)，90%酒精而过夜,再依次置于95%及无水乙醇各2 h. 根据组织块的大小不同以二甲苯透明, 一般来说两道二甲苯,每道二十分钟即可.温箱浸软蜡 1h后浸入硬蜡1h后包埋. 作7μm厚的各向同性切片，隔10张切片取1张, 每块组织所选的切片数不少于6张. 常规HE染色： 二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、95%, 90%, 80%及70%的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；入伊红染液染色10 min后依次入70%, 80%,90%酒精各1 min ,95%及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各3 min , 以二甲苯透明，中性树脂封片.
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好好工作
2楼2013-08-09 18:17:32
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yzwuhan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
iwish297: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 非常感谢，您的指点真详细。 2013-08-12 16:06:44
一般取成年小鼠的全脑，需要一般弯头眼科镊和眼科剪就可以，如果是胚胎期的脑，需要更小点的小动物手术剪刀。组织切片前，需要先用多聚甲醛灌流固定，否则在取出整脑后再固定有很多缺陷：1，表面固定太过，组织过硬，切片太脆易开裂；2，内部固定不重复（甲醛固定穿透力有限，大块组织固定需要灌流）。切片很有很多技巧，成年小鼠脑较大，冠状切面可达10mm*10mm，冰冻切片易产生皱褶，贴片很不美观，不过用比较高的温度切片是可以尝试的，-15°C的箱体温度下我成功切出过比较完整的冠状和失状切片。石蜡切片比较容易切出好片子，但后期处理去蜡过程比较繁琐。你可以先确定你的实验目标，如果只是做常规的组织化学分析，两种方法均比较容易做；如果要做原位杂交实验，冰冻切片更适合。祝好运！
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3楼2013-08-11 19:26:32
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