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硫酸铵沉淀
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| 今天进行硫酸铵沉淀蛋白的实验。但是在实验之前我忽视了溶液的ph 问题。再加入硫酸铵进行沉淀时，才注意到自己的容易pH 为12.硫酸铵加入后会释放氨气。。我想问这会对我的硫酸铵沉淀蛋白质有影响吗？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2, 辛苦了 2013-08-07 18:14:32
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silicare: 金币+2, 辛苦了 2013-08-07 18:14:32
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1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程；在乙酸的酯化反应中加入饱和碳酸钠溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分层现象更明显的过程。 2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。 3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂） 简单的说就是利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀；蛋白质的溶解度（S）不同，用于沉淀的盐浓度不同。 蛋白盐析的影响因素 1． 蛋白质的浓度： 中性盐沉淀蛋白质时，溶液中蛋白质的实际浓度对分离的效果有较大的影响。通常高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度即可将其沉淀下来，但若蛋白质浓度过高，则易产生各种蛋白质的共沉淀作用，除杂蛋白的效果会明显下降。对低浓度的蛋白质，要使用更大的硫酸铵饱和度，但共沉淀作用小，分离纯化效果较好，但回收率会降低。通常认为比较适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％，相当于25 mg/mL～30mg/mL。 2． 离子强度: 各种蛋白质的沉淀要求不同的离子强度。 3． 盐的性质： 最有效的盐是多电荷阴离子。 4． PH值： 一般说来，蛋白质所带净电荷越多，它的溶解度就越大。改变pH值可改变蛋白质的带电性质，因而就改变了蛋白质的溶解度。远离等电点处溶解度大，在等电点处溶解度小，因此用中性盐沉淀蛋白质时，pH值常选在该蛋白质的等电点附近。 5． 温度： 除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶介度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析。 6． 蛋白质沉淀后宜在4℃放3小时以上或过夜，以形成较大沉淀而易于分离。盐析时，分子量较小的蛋白质逐步沉淀下来可能就值得怀疑。具体的蛋白需要具体的摸索，当然，对肽来说，结论也是一样的。 盐析结晶原理 盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂, 这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强， 它使溶液中自由水分子数减小, 从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出， 这就是盐析结晶。 研究表明，水对阴、阳离子都有较强溶剂化作用，但对阳离子比阴离子有更大的溶剂化作用。因此盐析剂作用主要表现在盐析剂阳离子溶剂化作用上。盐析剂与水结合愈强烈，盐析效应愈强。由于水合数与离子的大小有关，即离子愈小，水合数就愈大，盐析效应也愈强。盐析剂所含阳离子半径愈小，电荷愈多，则对被盐析离子的水化层影响愈大，使被盐析离子脱水愈易，其盐析效应愈强。所以化工生产中常用的盐析剂多是离子势较大的阳离子Li+、Al3+、Fe3+、Mg2+、Sn2+等形成的盐。我们选择了这些阳离子所形成的氯化物和硝酸盐, 并通过探索性实验， 确定选用一种较合适的盐析剂。 |
2楼2013-08-07 15:22:25
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
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3楼2013-08-07 19:06:05
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