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[交流]
新人诚意请教，不知是否发对版面，关于农杆菌转化
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| 重组质粒冻融法转入农杆菌AGL1菌株，方法和系统均没问题，转化后得到的colony证实是转入了重组质粒，但奇怪的问题出现了。构建的重组质粒用于敲除某基因，在质粒上selective marker两侧插入了同源片段，即存在左右同源序列臂。用PCR验证农杆菌转化colony，selective marker能扩增出，证明质粒已转入农杆菌细胞，但当用左右同源序列引物扩增验证时发现一个colony只能扩增出左臂或者右臂，随机挑选10个colonies，大概有一半只能扩出左臂，而另一半只能扩出右臂。转化用的重组质粒验证无问题，农杆菌感受态重新制备过，其他人使用正常，以前做的也没问题。现在不知道问题在哪了，卡在这个问题上几个月了。这里高人多，期望有经验的老师帮忙解解惑， |
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