| 查看: 345 | 回复: 0 | |||
[交流]
新人诚意请教，不知是否发对版面，关于农杆菌转化
|
| 重组质粒冻融法转入农杆菌AGL1菌株，方法和系统均没问题，转化后得到的colony证实是转入了重组质粒，但奇怪的问题出现了。构建的重组质粒用于敲除某基因，在质粒上selective marker两侧插入了同源片段，即存在左右同源序列臂。用PCR验证农杆菌转化colony，selective marker能扩增出，证明质粒已转入农杆菌细胞，但当用左右同源序列引物扩增验证时发现一个colony只能扩增出左臂或者右臂，随机挑选10个colonies，大概有一半只能扩出左臂，而另一半只能扩出右臂。转化用的重组质粒验证无问题，农杆菌感受态重新制备过，其他人使用正常，以前做的也没问题。现在不知道问题在哪了，卡在这个问题上几个月了。这里高人多，期望有经验的老师帮忙解解惑， |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有154人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
