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helanfeifei

铁虫 (初入文坛)

[求助] HA试验

HA试验中出现血球自凝集的现象,原因是什么?
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我就是我
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-07-30 18:24:04
我觉得如果实验所用材料、操作没有污染实验的的话,可以考虑是由于血细胞的自然凝集,血细胞在没有3.8%枸橼酸钠或20%肝素钠条件下,是会自然凝集的,不知是否采取了抗凝措施
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
2楼2013-07-30 12:42:43
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helanfeifei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hkqgeoffrey at 2013-07-30 12:42:43
我觉得如果实验所用材料、操作没有污染实验的的话,可以考虑是由于血细胞的自然凝集,血细胞在没有3.8%枸橼酸钠或20%肝素钠条件下,是会自然凝集的,不知是否采取了抗凝措施

我是按照国标17999做的红细胞悬液,取血时使用了阿氏液,后期清洗时使用生理盐水,配制是1体积红细胞99体积生理盐水,过程中没有别的,灭菌措施都做到,试验中没有提到枸橼酸和肝素,加这个会影响效价测定吗?
我就是我
3楼2013-07-30 16:24:42
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by helanfeifei at 2013-07-30 16:24:42
我是按照国标17999做的红细胞悬液,取血时使用了阿氏液,后期清洗时使用生理盐水,配制是1体积红细胞99体积生理盐水,过程中没有别的,灭菌措施都做到,试验中没有提到枸橼酸和肝素,加这个会影响效价测定吗?...

我刚了解了一下,阿氏液配方中的柠檬酸钠,柠檬酸缓冲体系同时是抗凝成分,柠檬酸钠即枸橼酸钠,但抗凝成分配置为0.8g/100ml,常规血液抗凝使用柠檬酸钠为3.8%,但我本人没有亲自配置过红细胞悬液,望楼主查一下HA实验中抗凝成分浓度,可能是这个原因。
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
4楼2013-07-30 19:18:15
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helanfeifei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hkqgeoffrey at 2013-07-30 19:18:15
我刚了解了一下,阿氏液配方中的柠檬酸钠,柠檬酸缓冲体系同时是抗凝成分,柠檬酸钠即枸橼酸钠,但抗凝成分配置为0.8g/100ml,常规血液抗凝使用柠檬酸钠为3.8%,但我本人没有亲自配置过红细胞悬液,望楼主查一下HA实 ...

在HA试验过程中,在反应板小孔中出现的红细胞自凝集现象是为什么那?
我就是我
5楼2013-07-31 14:30:55
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d3dong

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你好,我对你的问题不是那么看的懂,不过我一直在做流感的HA,要是病毒有滴度,那么便不会沉淀(不知道是不是你说的自凝),要是没滴度便沉底,V型和U型板的效果不一样,一般都是加一排作为阴性对照,即沉淀就是阴性。至于洗红细胞的话,如果你前期加的有抗凝剂那便直接用PBS洗(或者是生理盐水);如果没加,那么在采血的时候要加入阿氏液(阿氏液也是可以抗凝的,本身成分有抗凝剂),然后用PBS或者生理盐水洗3-5遍,每次用1000-1800r\5min,最后一次1800r\10min,因为红细胞容易破,所以转速比较低。不过也要看你用的是什么红细胞了,红细胞洗干净的标准就是上清液是无色的,红细胞和PBS的分层比较明显,然后弃去上清液,这就是最后的红细胞,然后就可以配置你需要的浓度了!比如1%的红细胞,加1ml的红细胞,99ml的PBS,混匀,4°保存一周内可用,要是溶血就不要用了,影响HA。
6楼2013-08-01 23:06:03
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