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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关嗜热蛋白纯化的问题
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-29 15:47:34
His-tag可以切掉也可以不切掉，看活性和实验需求
需要切掉的话，就是加上EK酶切位点，切后蛋白序列和天然的一样。

请问如果要切掉his-tag，好切吗？我需要大量纯化蛋白，大量地蛋白都需要切his-tag，这个现实吗?
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nothing isimpossible
11楼2013-07-30 14:00:10
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roomofxw

木虫 (正式写手)
大量是多大量？mg，g？
用酶切就是看你要花的成本了，EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大，又不愿花钱
那NEB一款质粒，好像是改变一下洗脱条件，标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再大再大的量的话，那你的酶就是工业级了，那要不就不切His tag了，如果不影响活性。要不就是不加标签，各种柱纯化吧
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12楼2013-07-30 14:21:40
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-30 14:21:40
大量是多大量？mg，g？
用酶切就是看你要花的成本了，EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大，又不愿花钱
那NEB一款质粒，好像是改变一下洗脱条件，标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再 ...

纯化出酶只是做酶学性质研究就行了。具体多少也没算过。我想培养2,3升菌液产的酶就够了。
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nothing isimpossible
13楼2013-07-30 17:37:47
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roomofxw

木虫 (正式写手)
2，3L菌液一般也就百毫克级别的了，酶切问题不大，也就EK酶用量大点，多花点钱。
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14楼2013-07-31 09:08:26
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