24小时热门版块排行榜    

查看: 1064  |  回复: 13

hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-29 15:47:34
His-tag可以切掉也可以不切掉,看活性和实验需求
需要切掉的话,就是加上EK酶切位点,切后蛋白序列和天然的一样。

请问如果要切掉his-tag,好切吗?我需要大量纯化蛋白,大量地蛋白都需要切his-tag,这个现实吗?
nothing isimpossible
11楼2013-07-30 14:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

大量是多大量?mg,g?
用酶切就是看你要花的成本了,EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大,又不愿花钱
那NEB一款质粒,好像是改变一下洗脱条件,标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再大再大的量的话,那你的酶就是工业级了,那要不就不切His tag了,如果不影响活性。要不就是不加标签,各种柱纯化吧
12楼2013-07-30 14:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-30 14:21:40
大量是多大量?mg,g?
用酶切就是看你要花的成本了,EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大,又不愿花钱
那NEB一款质粒,好像是改变一下洗脱条件,标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再 ...

纯化出酶只是做酶学性质研究就行了。具体多少也没算过。我想培养2,3升菌液产的酶就够了。
nothing isimpossible
13楼2013-07-30 17:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

2,3L菌液一般也就百毫克级别的了,酶切问题不大,也就EK酶用量大点,多花点钱。
14楼2013-07-31 09:08:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hraikeyan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +20 不知道叫什么! 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 19:03 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
请填处理意见