24小时热门版块排行榜    

查看: 1307  |  回复: 13

hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-29 15:47:34
His-tag可以切掉也可以不切掉,看活性和实验需求
需要切掉的话,就是加上EK酶切位点,切后蛋白序列和天然的一样。

请问如果要切掉his-tag,好切吗?我需要大量纯化蛋白,大量地蛋白都需要切his-tag,这个现实吗?
nothing isimpossible
11楼2013-07-30 14:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

大量是多大量?mg,g?
用酶切就是看你要花的成本了,EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大,又不愿花钱
那NEB一款质粒,好像是改变一下洗脱条件,标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再大再大的量的话,那你的酶就是工业级了,那要不就不切His tag了,如果不影响活性。要不就是不加标签,各种柱纯化吧
12楼2013-07-30 14:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by roomofxw at 2013-07-30 14:21:40
大量是多大量?mg,g?
用酶切就是看你要花的成本了,EK酶不算便宜。
当然如果量很大很大,又不愿花钱
那NEB一款质粒,好像是改变一下洗脱条件,标签可以自己切掉。
再次就是使用羟胺之类的化学试剂切割了。
再 ...

纯化出酶只是做酶学性质研究就行了。具体多少也没算过。我想培养2,3升菌液产的酶就够了。
nothing isimpossible
13楼2013-07-30 17:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

2,3L菌液一般也就百毫克级别的了,酶切问题不大,也就EK酶用量大点,多花点钱。
14楼2013-07-31 09:08:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hraikeyan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +14 爱看书的可乐 2026-08-26 16/800 2026-08-26 16:47 by skyjudy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 基金不中,共勉 +3 eulota 2026-08-26 3/150 2026-08-26 16:17 by 路yyyy
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 我不理解! +8 Edward_pc 2026-08-26 13/650 2026-08-26 15:37 by Tide man
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见