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异硫氰酸胍水浴加热后溶解，常温下马上析出，这是怎么回事？
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最近在做精子DNA提取实验，采用参考文献“Methods of sperm DNA extraction for genetic and epigenetic studies”的方法，需配制含 高浓度（5M）异硫氰酸胍的裂解液，发现将异硫氰酸胍水浴加热溶解后，拿出水浴锅，温度一冷却下来立马析出，这是怎么回事？ 裂解液的成分： 5M 异硫氰酸胍 100mM NaCl； 1% SDS； 2% β-巯基乙醇 200ul/ml 蛋白酶K 具体配制过程如下： 由于异硫氰酸胍需水浴加热，我先配制了含100mM NaCl，1% SDS，2% β-巯基乙醇三种成分的溶液，取2ml配制后的溶液加入1.18g异硫氰酸胍，于65℃水浴中溶解，配制后存在以下两个问题： 1）如果我不马上加入蛋白酶K进行消化裂解，而是想将裂解液在常温下保存，从水浴锅拿出来后，溶液一回到常温硫氰酸胍立马会析出。 2）如果我加入蛋白酶K和精子样品，56℃下消化2h后，将样品取出做进一步抽提时，还是会析出沉淀，这是什么回事？消化之后我加入0.6倍体积异丙醇之后并没有见到絮状DNA。 所以我的疑问是： 异硫氰酸胍在溶解配制裂解液（常用于提取RNA）时有什么要求吗？PH，溶剂类型？ 如果异硫氰酸胍析出是正常现象，那近一步实验应该怎么改进，有没有什么好的建议？ 另：异硫氰酸胍为前2天刚从solarbio（索来宝）公司买的，质量上应该没有问题。 附近为参考文献 |
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2013-07-24 22:24:25, 184.86 K
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