| 查看: 7198 | 回复: 23 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
关于GatewayBP反应的很多问题——劳烦各位牛人
|
|||
|
最近我一直在做Gateway入门载体BP反应。发现一些问题。 1.BP反应前需要设计一段加接头的基因特异性引物做全长基因pcr扩增，接头序列让我很捉摸不透。师兄告诉我 上游引物前附加：5'-3': GGGGACAACTTTGTACAAAAAAGTTGGA 下游引物前附加：5'-3': GGCGGCCGCACAACTTTGTACAAGAAAGTTGGGTA 可是我发现这跟官方说明书Gatewayman上面的attB PCR Primers序列不一样，我是菜鸟，真的不明白怎么回事，这对后面的BP反应有影响吗。 2.这两天做了BP反应连接转化，挑斑（过夜连接，每个平板大约10几20个斑，很少），然后菌落PCR（M13引物）发现5个基因的电泳条带基本上完全一致，700-800bp左右，而我的5个基因应该是1500bp左右，我捉摸着是不是都是空载体。会不会是都没连接上，也不知道是哪出了问题，用高保真酶扩基因全长条带都很单一也是目的片段，就是不知道为什么会这样，各位大侠牛人教教小女子吧！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有11人回复
-
救命帖
已经有5人回复
-
限项规定
已经有5人回复
-
为什么nbs上溴 没有产物点出现呢
已经有9人回复
-
招博士
已经有3人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有35人回复
-
最失望的一年
已经有18人回复
-
求推荐博导
已经有4人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
限广州，征女友
+2/184
-
东北大学-招收2026年硕士研究生2-3名（金属材料3D打印方向）
+5/160
-
西南大学化学化工学院彭云贵教授课题组招有机化学博士研究生
+2/112
-
大连理工大学智能系统实验室优秀硕博研究生招生
+1/80
-
北京大学季者课题组招聘博士后和科研助理/化学/化生/生命科学/物理/工程等
+1/76
-
中国科协青年托举（针对32岁青年人才的）是不是不搞了，25年都没有通知
+1/68
-
辽宁材料实验室框架复合材料课题组招收联合培养研究生（长期有效）
+2/68
-
[长期合作招募] 同济大学肖倩老师团队诚邀港澳学者学术交流
+1/53
-
中山大学农业与生物技术学院周潇峰课题组诚聘微生物/植物病理学方向科研助理
+1/43
-
[长期合作招募] 同济大学肖倩老师团队诚邀港澳学者学术交流
+1/34
-
上海交通大学 碳纳米管、阵列、器件应用博士后招聘
+1/32
-
美国密苏里大学堪萨斯城分校（UMKC）生物材料诚聘全奖博士
+1/30
-
国重点实验室双一流A类长江学者团队招2026年全日制博士1-2名
+2/20
-
2026申博自荐 本硕双一流学科 纳米药物递送方向 一篇一区TOP 两个国家奖学金
+1/14
-
哈尔滨工业大学（深圳）-包斌招收2026年博士研究生及博士后
+1/9
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/5
-
多伦多城市大学深度学习方向博士后
+1/4
-
意大利米兰理工大学Lorenza Petrini教授招收玛丽居里MEDALLOY博士
+1/2
-
河北工业大学层状材料与器件团队诚聘二维材料与原位电子显微学方向青年教师与博士后
+1/2
-
换工作
+1/2
20楼2013-07-25 10:24:34
13楼2013-07-22 08:34:45