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yspain

新虫 (小有名气)

[求助] 转基因拟南芥的鉴定及筛选

请问,构建的pbi121载体,农杆菌介导法侵染的拟南芥。得到了种子,种下去之后,kana板上筛选出来的拟南芥(共60来棵),cDNA和DNA都扩增不出目的条带是怎么回事?PBI121带有kana抗性,用kana的引物扩却能扩出kana的带,难道是转的空载体?可是农杆菌的菌液PCR却有目的条带啊。有木有大虾知道此类问题的,求指点!谢谢!!!
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

卡那抗性的载体很难筛选的, 要摸索一下卡那的浓度,尽量选好公司的卡那,最终结果得以PCR为准的。象ABRC上的种子都是卡那抗性,但大家都不用卡那筛选来鉴定,就是因为难筛,还不如直接做PCR.
2楼2013-07-22 08:10:39
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yuanuancao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

卡纳的假阳性很高,浓度尽量高一点,我们一般都用100mg/L 以上
3楼2013-07-22 11:23:49
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linmanman

金虫 (小有名气)

楼主你是用的多大的浓度啊?
4楼2013-09-18 11:09:41
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yspain

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by linmanman at 2013-09-18 11:09:41
楼主你是用的多大的浓度啊?

100mg/L
5楼2013-09-22 21:22:26
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linmanman

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yspain at 2013-09-22 21:22:26
100mg/L...

  多谢楼主,千秋万代,一统江湖!我还是去筛拟南芥吧。。
6楼2013-09-23 16:36:12
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