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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因拟南芥的鉴定及筛选
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yspain

新虫 (小有名气)

[求助] 转基因拟南芥的鉴定及筛选

请问，构建的pbi121载体，农杆菌介导法侵染的拟南芥。得到了种子，种下去之后，kana板上筛选出来的拟南芥（共60来棵），cDNA和DNA都扩增不出目的条带是怎么回事？PBI121带有kana抗性，用kana的引物扩却能扩出kana的带，难道是转的空载体？可是农杆菌的菌液PCR却有目的条带啊。有木有大虾知道此类问题的，求指点！谢谢！！！
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1楼 2013-07-20 12:54:48
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

卡那抗性的载体很难筛选的， 要摸索一下卡那的浓度，尽量选好公司的卡那，最终结果得以PCR为准的。象ABRC上的种子都是卡那抗性，但大家都不用卡那筛选来鉴定，就是因为难筛，还不如直接做PCR.
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2楼2013-07-22 08:10:39
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yuanuancao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

卡纳的假阳性很高，浓度尽量高一点，我们一般都用100mg/L 以上
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3楼2013-07-22 11:23:49
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linmanman

金虫 (小有名气)
楼主你是用的多大的浓度啊？
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4楼2013-09-18 11:09:41
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yspain

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by linmanman at 2013-09-18 11:09:41
楼主你是用的多大的浓度啊？

100mg/L
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5楼2013-09-22 21:22:26
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linmanman

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yspain at 2013-09-22 21:22:26
100mg/L...

  多谢楼主，千秋万代，一统江湖！我还是去筛拟南芥吧。。
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6楼2013-09-23 16:36:12
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