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lqz816

新虫 (初入文坛)

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虫号: 86635
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性别: GG
专业: 作物分子育种

【答案】应助回帖

接着上面来
感谢13楼XOooZzz的信息，对我解决问题有很大帮助。
今天按照文献的提示改进得到正确片段大小的PCR产物。文献中提到的三大黄金法则：降低模板浓度，延长延伸时间，减少循环次数。
附我原先的方法：酶-kod plus neo, 扩增目的片段大小-835bp，含两个230bp的串联重复，98度变性10s, 68度30s，35circles,模板50-100ng/50u。结果：只有500bp左右的带。改进l方法：1、模板浓度：5-20ng/ul；2、变性温度94度30s 3、延伸时间2min 4、30circles ，改进结果：一个质粒模板用得少的得到纯的目的片段而无杂带，另一个稍高的两条带俱有。
愚以为模板质粒质量也比较重要，若双链断裂的多，且用量又较多的话，扩增得到目的带的概率达到降低。

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11楼2014-08-13 23:48:16

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不要理会这句话“感谢13楼XOooZzz的信息，对我解决问题有很大帮助。”这是回复类似其他帖子时拷过来的

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12楼2014-08-13 23:49:38

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