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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菜虫的问题：关于细菌DNA提取
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wxhy

木虫 (正式写手)

[交流] 菜虫的问题：关于细菌DNA提取

1.在提取细菌DNA时，5mL培养基离心得到的芽孢杆菌体加入2mL TE, 50mg/mL (4uL)溶菌酶之后，37度保温20分钟之后，总是有沉淀，而同时做的一株其他菌却非常的澄清。

请问，这究竟是什么原因？怎么解决？如果加大溶菌酶的量，或者保温的时间加长，一般是可以把沉淀溶解，这样是不是对基因组DNA有影响呢？
----------------------------------------

2.溶菌酶溶液，蛋白酶K溶液和RNsase溶液能在4度保存吗？能保存多久？



各位专家能否提供较为详细的经验和理论，我十分感激！

[ Last edited by asr on 2007-10-31 at 12:31 ]
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1楼 2007-10-31 11:16:31
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自然风

铁杆木虫 (知名作家)

I'm loving plantsoil
★
telomerase(金币+1,VIP+0):thanks！
芽孢杆菌是阳性菌，溶菌酶终浓度一般需要3mg/ml，可能是你的对照菌株是阴性菌，所以效果较好。

酶一般需要保存在—20度（还要避免反复冻融），4度保存很容易失活。
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世事喧嚣，人生寂寞
2楼2007-10-31 19:43:04
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wxhy

木虫 (正式写手)
溶菌酶终浓度一般需要3mg/ml，那么能告诉我保温的时间长短怎么确定吗？是否一定是等到完全澄清才算是比较好呢？
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3楼2007-11-01 16:15:19
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lingyu20071001

银虫 (小有名气)
有的阳性菌较难破壁，可以把多加点溶菌酶，对基因组影响应该并不太大，我提染色体的时候就是这样做的
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4楼2007-11-01 21:18:56
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goses

金虫 (小有名气)
G+细胞壁都狂厚，代表菌就是金葡了，不过提DNA一般用不上溶菌酶。提质粒是必须用的，我加的5mg/ml，37度应该40-60m，每隔10分钟混悬一次。
溶菌酶最好是粉末存-20，现用现配，溶液存4度不能超过1周
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自己不曾拥有，就快乐地欣赏别人的拥有，不让日子沦于黯淡，不让心绪隐于灰颓
5楼2007-11-05 15:23:08
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