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wxhy

木虫 (正式写手)

[交流] 菜虫的问题:关于细菌DNA提取

1.在提取细菌DNA时,5mL培养基离心得到的芽孢杆菌体加入2mL TE, 50mg/mL (4uL)溶菌酶之后,37度保温20分钟之后,总是有沉淀,而同时做的一株其他菌却非常的澄清。

请问,这究竟是什么原因?怎么解决?如果加大溶菌酶的量,或者保温的时间加长,一般是可以把沉淀溶解,这样是不是对基因组DNA有影响呢?
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2.溶菌酶溶液,蛋白酶K溶液和RNsase溶液能在4度保存吗?能保存多久?



各位专家能否提供较为详细的经验和理论,我十分感激!

[ Last edited by asr on 2007-10-31 at 12:31 ]
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自然风

铁杆木虫 (知名作家)

I'm loving plantsoil


telomerase(金币+1,VIP+0):thanks!
芽孢杆菌是阳性菌,溶菌酶终浓度一般需要3mg/ml,可能是你的对照菌株是阴性菌,所以效果较好。

酶一般需要保存在—20度(还要避免反复冻融),4度保存很容易失活。
世事喧嚣,人生寂寞
2楼2007-10-31 19:43:04
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wxhy

木虫 (正式写手)

溶菌酶终浓度一般需要3mg/ml,那么能告诉我保温的时间长短怎么确定吗?是否一定是等到完全澄清才算是比较好呢?
3楼2007-11-01 16:15:19
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lingyu20071001

银虫 (小有名气)

有的阳性菌较难破壁,可以把多加点溶菌酶,对基因组影响应该并不太大,我提染色体的时候就是这样做的
4楼2007-11-01 21:18:56
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goses

金虫 (小有名气)

G+细胞壁都狂厚,代表菌就是金葡了,不过提DNA一般用不上溶菌酶。提质粒是必须用的,我加的5mg/ml,37度应该40-60m,每隔10分钟混悬一次。
溶菌酶最好是粉末存-20,现用现配,溶液存4度不能超过1周
自己不曾拥有,就快乐地欣赏别人的拥有,不让日子沦于黯淡,不让心绪隐于灰颓
5楼2007-11-05 15:23:08
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