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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
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hhxq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hhxq at 2013-07-17 09:14:16
个人觉得换载体表达比较有效。想pGEX以及SUMO等载体就能增加蛋白的可溶性。还有可以试试别的表达菌株，如transB就有利于含二硫键蛋白的折叠。

你可以试试pGEX-6P-1或者4T-1，不过你得有GEX的纯化柱子，还有相应的酶才能把蛋白切下来。
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11楼2013-07-18 08:53:07
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hhxq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by hhxq at 2013-07-18 08:53:07
你可以试试pGEX-6P-1或者4T-1，不过你得有GEX的纯化柱子，还有相应的酶才能把蛋白切下来。...

是GST的纯化柱子。
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12楼2013-07-18 08:54:28
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pypsak

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在真核生物中表达 最方便，现在不是可以在植物中表达了吗。
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13楼2013-07-18 09:28:44
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大脸猫猫喵

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
25度低温诱导，IPTG加倍。试试看
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14楼2013-07-18 10:44:32
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南林大蕙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 大脸猫猫喵 at 2013-07-18 10:44:32
25度低温诱导，IPTG加倍。试试看

低温25度，IPTG加倍感觉理论上应该是蛋白表达量增加啊，那包涵体不就更严重了
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15楼2013-07-19 11:07:58
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大脸猫猫喵

金虫 (初入文坛)
理论上是，但我做的经验是效果比较好的。所以你可以试试看。
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16楼2013-07-19 19:06:27
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alex4388

新虫 (初入文坛)
有些蛋白只能是包涵体的
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17楼2013-07-19 20:01:32
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)
可以换表达载体，降低诱导温度，超声破碎是比较剧烈的，要在这部当心，不放心可以测个粗酶活
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科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
18楼2013-10-28 14:21:45
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 风之游魂 at 2013-07-17 16:39:26
最根本的解决方式还是添加信号肽

添加信号肽把目的蛋白分泌到培养基中？？有没有通用的信号肽使目的蛋白分泌到培养基中，加入我用的大肠杆菌原核生物表达系统，，我想采用大肠杆菌溶血素系统能不能把我的目的蛋白分泌到胞外。？？
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
19楼2015-03-30 22:27:10
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 风之游魂 at 2013-07-17 16:39:26
最根本的解决方式还是添加信号肽

怎么添加信号肽，能不能指点一番，谢谢你了，给个参考文献也行，
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
20楼2015-04-01 13:49:49
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