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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌总蛋白看不到目的条带

最近在做重组蛋白的表达,首先我想看我的目的蛋白有没有表达,加了几个 对照样,有marker ,空载体BL21,经诱导和未诱导的菌体,但是看不出明显的条带。之后为了进一步确定我的蛋白有没有表达,我又做了纯化,纯化之后条带很明显,而且是单一条带。可是为什么菌体总蛋白看不出来呢?希望大家帮着解决下
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yitonghui

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
田甜思(myprayer代发): 金币+1, 回答很好,perfect 2013-07-16 10:07:17
1.表达量比较低,纯化也是个浓缩过程,所以看到了。
2.目的条带和杂蛋白重合,并且量低,所以菌体中不太容易看到。
3.应该进一步确认你纯化出来的就是你要的蛋白,单靠电泳不可靠。
2楼2013-07-16 08:54:58
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