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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多抗效价检测：请问如何包被抗原？免疫原是灭活的菌体
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yangls103

禁虫 (小有名气)
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蛋白质生物学实验经验

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1楼 2013-07-12 17:07:43
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-18 22:00:22
直接用你的免疫原就行了，不过包被浓度要高一点（10 μg/mL），以前我们全菌免疫的时候效价不会太高，也就4000-10000左右，所以你稀释梯度别太高，试试吧！其实挺简单的。五免也要赶紧了，不然后面效价下降就得不偿失了。希望对你有用。
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Orbetterit,orenjoyit!
2楼2013-07-16 10:25:00
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
yangls103: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-17 09:44:26
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-18 22:00:33
2楼正解，如果免疫次数过多，有可能效价就会下降，效价是个曲线增长的过程，不过包被抗原可以做个梯度也可以，包被浓度过大，增大非特异性吸附，也会影响效价的检测。可以从0.25μg/mL开始设置梯度
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3楼2013-07-16 13:52:38
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yangls103

禁虫 (小有名气)
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4楼2013-07-17 09:43:22
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-18 22:00:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-16 13:52:38
2楼正解，如果免疫次数过多，有可能效价就会下降，效价是个曲线增长的过程，不过包被抗原可以做个梯度也可以，包被浓度过大，增大非特异性吸附，也会影响效价的检测。可以从0.25μg/mL开始设置梯度

这个包被浓度的问题倒是不用怕太多，有对照在的话，没问题的，稀释梯度就是你侧效价的时候，将血清稀释成不同的浓度，可以是等比数列梯度，你可以看一下效价的定义。
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5楼2013-07-17 09:49:10
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yangls103

禁虫 (小有名气)
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6楼2013-07-17 09:50:26
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家
★
gyesang: 金币+1, 鼓励跟贴交流！ 2013-07-18 22:01:17
引用回帖:
2楼: Originally posted by jfj_tj at 2013-07-16 10:25:00
直接用你的免疫原就行了，不过包被浓度要高一点（10 μg/mL），以前我们全菌免疫的时候效价不会太高，也就4000-10000左右，所以你稀释梯度别太高，试试吧！其实挺简单的。五免也要赶紧了，不然后面效价下降就得不偿 ...

测定个效价，还没有必要优化包被浓度的吧，大侠，用抗原去检测抗体，至于您说的非特异吸附，个人觉得有对照组，做出来可以扣去背景的吧，至于您说的从0.25μg/mL开始，我做的全菌免疫就是后面做过期盼滴定也没有这么低的，或许是我们的抗原不是很好吧！
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7楼2013-07-17 09:53:30
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家
引用回帖:
3楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-16 13:52:38
2楼正解，如果免疫次数过多，有可能效价就会下降，效价是个曲线增长的过程，不过包被抗原可以做个梯度也可以，包被浓度过大，增大非特异性吸附，也会影响效价的检测。可以从0.25μg/mL开始设置梯度

不小心点了回复到三楼去了，：这个包被浓度的问题倒是不用怕太多，有对照在的话，没问题的，稀释梯度就是你侧效价的时候，将血清稀释成不同的浓度，可以是等比数列梯度，你可以找点资料看一下效价的定义，那样你对稀释梯度就理解了，不难的。“
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8楼2013-07-17 09:58:35
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jfj_tj at 2013-07-17 10:53:30
测定个效价，还没有必要优化包被浓度的吧，大侠，用抗原去检测抗体，至于您说的非特异吸附，个人觉得有对照组，做出来可以扣去背景的吧，至于您说的从0.25μg/mL开始，我做的全菌免疫就是后面做过期盼滴定也没有这 ...

0.25是从比较低的浓度开始，基本上那个浓度是做不出来的，优化抗原浓度如果你觉得没必要就没必要呗，关键是你自己定义的包被浓度是如何得到的呢？优化下还是比较严谨的吧
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9楼2013-07-18 11:00:50
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