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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变
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大风吹

银虫 (小有名气)

[求助] 定点突变

我最近做启动子定点突变 设计一段含突变位点的引物序列 以质粒为模板PCR 产物DpnI切后转化DH5a 长出来的菌落 挑单菌落在抗性培养基中生长正常 提质粒测浓度值较低 但是跑胶一看就是拖尾的一片带 测序也没结果 做了好几次都是这样质粒提取试剂盒没有问题 抗生素也未失活 不知道是哪里出问题了 大家帮忙鉴定一下 多谢
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1楼 2013-07-05 09:53:57
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-05 14:55:29
你做的是什么启动子？
希望不是因为你改变了启动子后对整个的plasmid有了影响...
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2楼2013-07-05 12:49:58
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 大风吹 at 2013-07-08 09:49:56
我就是突变了两个碱基 有那么大影响吗

有可能你突变时出现了一些意外，例如出现了其他你不想要的改变。即使你用pfu，他也存在risk的
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4楼2013-07-09 15:30:10
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