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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 合成的引物有1M和50mM Na+两个退火温度，实际做PCR以哪个为准

英潍杰基合成的引物有1M和50mM Na+两个退火温度，实际做PCR以哪个为准

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-4 at 10:29 ]
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自己的路只有自己能负责
1楼2013-07-03 12:27:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-04 17:28:29
赵建雪: 金币+2 2013-07-17 21:45:27
两个都是做参考的，你实际所用的最佳退火温度需要自己实验摸索，最好做个退火温度梯度。。
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2楼2013-07-04 03:00:44
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-07-04 09:51:38
赵建雪: 金币+3 2013-07-17 21:45:18
1M和50mM Na+两个退火温度，可能后面一个浓度更接近你PCR的离子浓度吧。
你用的什么软件来做的引物设计？一般设计引物的软件会给你一个退火温度，我一直都用软件算出来的温度，效果也还不错。
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3楼2013-07-04 08:33:52
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-04 08:33:52
1M和50mM Na+两个退火温度，可能后面一个浓度更接近你PCR的离子浓度吧。
你用的什么软件来做的引物设计？一般设计引物的软件会给你一个退火温度，我一直都用软件算出来的温度，效果也还不错。

引物是自己设计的，退火温度是用DNAMAN分析的，跟50mM相差很大
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自己的路只有自己能负责
4楼2013-07-05 09:58:19
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-04 03:00:44
两个都是做参考的，你实际所用的最佳退火温度需要自己实验摸索，最好做个退火温度梯度。。

引物是自己设计的，参考其他近缘植物，能不能扩出来还待定，是怕本来就扩不出来， 范围太大做无用功
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自己的路只有自己能负责
5楼2013-07-05 10:00:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 赵建雪 at 2013-07-05 10:00:23
引物是自己设计的，参考其他近缘植物，能不能扩出来还待定，是怕本来就扩不出来， 范围太大做无用功...

引物一般在一定范围之内都能P出来，只是效率可能会不一样。能不能P出来自己实验试试就知道了。
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6楼2013-07-05 16:02:29
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