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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 蓝藻DNA提取，液氮研磨
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oranzxc

金虫 (初入文坛)
要一直持续补充液氮，你的潮湿了就是液氮没了冷的样品凝结的空气中的水造成的
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凝霜枫叶
11楼2013-07-01 09:29:31
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by oranzxc at 2013-07-01 09:29:31
要一直持续补充液氮，你的潮湿了就是液氮没了冷的样品凝结的空气中的水造成的

哦，是这样呀，谢谢
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12楼2013-07-01 14:08:26
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-29 08:26:54
丝状藻比单细胞藻更好破。蓝藻的细胞比较小，液氮研磨的效果不是很好。...

我来查查文献，试试，请问您有相关的参考文献吗？能不能发给我一份呢，谢啦
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13楼2013-07-01 14:14:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 凝霜枫叶 at 2013-07-01 14:14:10
我来查查文献，试试，请问您有相关的参考文献吗？能不能发给我一份呢，谢啦...

我用的方法没有文献，是实验室protocol。你如果要酶学方法里的老方法的话我可以发给你。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

凝霜枫叶
14楼2013-07-02 00:25:59
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 00:25:59
我用的方法没有文献，是实验室protocol。你如果要酶学方法里的老方法的话我可以发给你。...

那你实验室的protocol和酶学老方法都方便告诉我吗？真心感谢呀，，我的邮箱jiaoshujing1988@163.com，方便的话请发给我吧，
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15楼2013-07-02 08:51:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 凝霜枫叶 at 2013-07-02 08:51:33
那你实验室的protocol和酶学老方法都方便告诉我吗？真心感谢呀，，我的邮箱jiaoshujing1988@163.com，方便的话请发给我吧，...

我用的方法：
1. Scratch a loop of cells from a plate and resuspend cells into 0.5 ml of isolation buffer (50 mM Tris-HCl pH 8.5, 5 mM EDTA, 50 mM NaCl)
2. Add 10 μg DNase-free RNase
3. Add same volume of phenol, heat at 65°C for 5-10 min, mix 2-3 times in between
4. Extract 2 x with phenol:chloroform (1:1) and once with chloroform:amyalcohol (24:1), invert tubes gently by now and then for 5 min
5. Add 1 µg RNase, RT for 30 min
6. Add 1/10V 3M sodium acetate pH5.2, and 2V cold ethanol, store at -20 °C 2h or over night
7. Collect DNA at 14 000 g for 15 min, wash the pellet with 70 % ethanol.
8. Dissolve pellet into 100 µl of TE/water/ 5 mM Tris-HCl pH 8.
所得DNA的浓度大致为几百ng/μl，取0.5-1μl为模板做PCR即可。

酶学方法167卷的方法见附件：
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  • 附件 1 : 82[78]DNAtransformation.pdf
    • 2013-07-02 10:01:58, 580.58 K

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

凝霜枫叶
16楼2013-07-02 10:02:25
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sh_9153

银虫 (小有名气)
倒的时候有可能会出来，研磨的时候不是很厉害，小心点就好
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17楼2013-07-02 10:13:36
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by sh_9153 at 2013-07-02 10:13:36
倒的时候有可能会出来，研磨的时候不是很厉害，小心点就好

请问研磨的时候需要很大力度吗？
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18楼2013-07-02 13:24:22
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 10:02:25
我用的方法：
1. Scratch a loop of cells from a plate and resuspend cells into 0.5 ml of isolation buffer (50 mM Tris-HCl pH 8.5, 5 mM EDTA, 50 mM NaCl)
2. Add 10 μg DNase-free RNase
3. Add same  ...

研究一下，谢谢啦
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19楼2013-07-02 13:25:46
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凝霜枫叶

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-02 10:02:25
我用的方法：
1. Scratch a loop of cells from a plate and resuspend cells into 0.5 ml of isolation buffer (50 mM Tris-HCl pH 8.5, 5 mM EDTA, 50 mM NaCl)
2. Add 10 μg DNase-free RNase
3. Add same  ...

请问第五步和第八步是微克和微升吗？Add 1 µg RNase,100 µl
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20楼2013-07-02 16:20:48
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