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happynie木虫 (正式写手)
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[求助]
弱弱的问下TTC定量测种子活力
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| TTC法其中有一步是：将样品倒入研钵，加少许分析纯石英砂及丙酮，充分研碎，把研磨液全部倒入容量瓶中，再用丙酮冲洗研钵2~3次，并倒入容量瓶。这个里面丙酮的作用是什么？可以用乙醇替换不？ |
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2楼2013-08-21 16:20:17
【答案】应助回帖
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happynie: 金币+29, ★★★很有帮助, 都给你了 2013-08-21 16:28:49
happynie: 金币+29, ★★★很有帮助, 都给你了 2013-08-21 16:28:49
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三. 实验设备及药品 1．紫外-可见光分光光度计、分析天平、50mL棕色容量瓶、50mL三角瓶、比色皿 2．4mg/mL的TTC溶液：取400mg TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑，分析纯）和2g葡萄糖(0.1mol/L)分析纯溶于少量蒸馏水中，再稀释到100mL的容量瓶中，贮存于棕色瓶中， 一周更换一次。 3. Tris-HCl缓冲液（pH=8.4）：称取6.037g Tris（三羟甲基氨基甲烷，分析纯），再加入20ml 1mol/L的盐酸，再定容至1L。 4. 10%硫化钠：称取10gNa2S（分析纯），定容到100mL的容量瓶中。 5. 无氧水：0.36g亚硫酸钠定容到100ml容量瓶中。 四. 实验步骤 1．标准曲线的绘制 ⑴ 不同浓度的TTC系列溶液的配置：从TTC溶液中移取1，2，3，4，5，6，7mL放入七个50mL的容量瓶中，定容到50mL。 ⑵ 取7支试管，分别加入2mL Tris-HCl缓冲溶液、2mL无氧水、2mL不同浓度的TTC溶液,第八支为对照组。每支试管各加入1mL 10% Na2S溶液混合，摇匀，放置20min，使TTC全部还原成红色的TF。各管加入5mL氯仿，振荡摇匀以提取TF，稳定数分钟。取下层的氯仿溶液在分光光度计上，波长485nm比色。并作出标准曲线。 2. 土壤中微生物的脱氢酶活性测定 ⑴ 取待测土样2g于50mL三角瓶中，接种于20ml基础培养基中，放少许灭菌后的玻璃珠，放入摇床震荡2h。 ⑵ 将土壤混合液全部转入离心管离心，3000rpm，15min，取出离心管，将上清液倒入50mL容量瓶中，再用纯水离心洗涤三遍，上清液均倒入50mL容量瓶中，洗涤后沉淀 用纯水稀释并转移至另一50mL容量瓶中，分别定容 ⑶ 从两个容量瓶中各分取5mL混合液，分别加入5mLTris-HCl缓冲溶液5mL蒸馏水及10mL TTC溶液；同时从每个容量瓶中分别吸取5mL混合液，加入5mLTris-HCl缓冲溶液5mL蒸馏水及10mL TTC溶液，再加入0.5mL甲醛固定以作样品空白；将空白与待测样品分别在37°C下振荡培养30min，然后向管内加入2mL硫酸终止酶反应 ⑷ 向样品培养液及空白对照管内各加入5mL氯仿萃取TF10min，3000r/min离心5min后取氯仿溶液，于波长485nm的进行比色，记录吸光值，根据样品显色液与样品空白的吸光值的差，查标准曲线，进而得出脱氢酶的活性。 ⑸ 对比以上清液和离心沉淀分别测得的吸光度值，确定土壤脱氢酶活性测定的取样点。并确定以后的标准方法 五. 实验结果分析和思考题 脱氢酶活性可按下式进行计算： TF=25*(1+θm)*A*B 单位：g/g干土 其中：25为换算常数 θm为土壤质量含水率 A为标准曲线上的计数 B为培养时间校正值，即反应时间除以60分钟  |
3楼2013-08-21 16:23:06
