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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 载体酶切位点与目的片段重复
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
MOQIA1989: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢~ 2013-06-26 09:39:52
一般先把目的基因设计出来之后连接到一个简单的载体上，这一步基本是试剂公司做，目的是方便保存目的基因，然后买来之后设计前后引物把目的基因扩增出来，然后再和需要的载体连接。
那个PMD-19T一般是分子量比较小也没有太多位点的简单载体吧？你要是自己从第一步就自己开始做的话，我感觉也差不多，总之19T和目标基因之间不需要双酶切，只需要扩增即可
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11楼2013-06-25 14:08:51
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kehuang611

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接后再扩增，那你测序对于表达来讲还有什么意义？？直接酶切，酶连。你说的什么混有载体片段的情况不会出现的，因为你凝胶回收时切的只有你所需大小的目的片段，放心做，这样才是正确的路线。
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向大家学习
12楼2013-06-25 15:27:05
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MOQIA1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by rv1nm2y at 2013-06-25 14:08:51
一般先把目的基因设计出来之后连接到一个简单的载体上，这一步基本是试剂公司做，目的是方便保存目的基因，然后买来之后设计前后引物把目的基因扩增出来，然后再和需要的载体连接。
那个PMD-19T一般是分子量比较小 ...

谢谢~~~
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13楼2013-06-26 09:38:27
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pilgrim-cai

铁虫 (初入文坛)
建议你用pMD19-T  simple 载体，这个载体是改造过的，没有其他的酶切位点。takara公司就有！
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14楼2013-06-26 20:53:23
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