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请教关于Sephacryl 丙烯酰胺葡聚糖凝胶的问题~~
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最近要分离纯化蛋白质，我所要的组分大致分子量在200KDa左右，想用Sephacryl 尝试一下，实验室冰箱里有以前用过的Sephacryl S200和Sephacryl S300，但是没有说明书不知道选用哪个合适，在网上搜了一圈也没找到详细的关于Sephacryl的资料，有几个问题请教： 1、不同型号Sephacryl的分辨范围 2、对于以前使用过的Sephacryl再利用如何处理？ 3、处理及装柱过程与葡聚糖凝胶柱有什么区别吗？ 4、使用长100cm内径1.0cm的柱子可以吗？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-24 21:16:20
稚涵晓晓: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-24 23:02:30
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137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-24 21:16:20
稚涵晓晓: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-24 23:02:30
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1).Sephacryl S100分离范围是1kD~100kD之间；Sephacryl S200分离范围是5kD~250kD之间;Sephacryl S300分离范围是10kD~1500kD之间。 2）.先用0.5M NaOH冲洗柱子1CV，再用20%的乙醇冲洗柱子1CV至1.5CV.将洗好的柱子放置在4度环境下等待下次再用！也可以将它倒出来用真空泵将其抽干，留于下次再用！ （All commonly used buffers, 0.2 M NaOH, 0.1 M HCl, 1 M acetic acid, 8 M urea, 6 M guanidine HCl, 1 % SDS, 20 % ethanol, 30 % propanol丙醇, 30 % (acetonitrile tested at 40°C for 1 week), 0.5 M NaOH (only for cleaning-in-place） 3）.装柱与葡聚糖凝胶柱没有什么区别，都是要将其装到分离效果达到最好！ 4）.使用多长的柱子看你的需要了，你的上样体积是多大的。你就选多长的！长的柱子分离效果会好点！一般上样量是柱体积的0.5%~5%！ |
2楼2013-06-24 12:35:27
3楼2013-06-24 13:09:05
4楼2013-06-24 19:38:55
5楼2013-06-24 23:03:45
6楼2013-07-04 12:05:00