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beibei1225铁虫 (初入文坛)
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[求助]
请问如何对软琼脂克隆形成实验进行细胞计数和染色？
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请问如何对软琼脂克隆形成实验进行细胞计数和染色？需要染料染细胞吗还是直接在镜下计数？ [ Last edited by youlinglyw on 2014-3-15 at 19:33 ] |
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3楼2014-03-15 17:30:12
【答案】应助回帖
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细胞计数方法 实验原???： 当待测细胞悬液中细胞???匀分布时， 通过测定一定体积悬液中的细胞 的数目，?????????算出??毫???细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体??作： 1. 将计数??????盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数???。 2. 将细胞悬液???出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数???之间，??? 置 3min ，注??盖片下????有气泡，也??能让悬液??入??边槽中。 3. 计算???四大格细胞总数，压线细胞???计左侧和上方的。然???按公??计算： 细胞数 /mL= 四大格细胞总数/4×10 4 说明：公??中除以 4 ，因为计数了 4 个大格的细胞数。 公??中乘以 10 4 因为计数???中??一个大格的体积为： 1.0mm （长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高） =0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3 （注??： 镜下?????有两个以上细胞组??的细胞团， 应按???个细胞计算， 若细胞团 10% 以上，说明分散??好，需??新制备细胞悬液） 细胞计数方法： ①盖好盖玻片：???一套血???计数???，将特制的盖玻片盖在血???计数槽上。 ②制备计数用的细胞悬液： 用???管??? 5 滴细胞悬液到离心管中， 加入 5 滴锥虫?? 染液（ 0.4 ％）或苯胺黑，活细胞??会被染色，加入染液???就???以在显微镜下区 别活细胞和死细胞。 ③将细胞悬液滴入计数???： 将待测细胞悬液??????匀， 然?????????少??悬液沿盖片边 缘缓缓滴入， ??????盖片下充满悬液， 注??盖片下????有气泡， 也??能让悬液?? 入??边槽中。 ④统计 4 个大格的细胞数： 将血???计数???放于显微镜的低??镜下观察， 并移动计 数???，当看到镜中出现计数方格???，数出四角的 4 个大铬（??个大格???有 16 个 中格）中没有被染液染上色的细胞数目。 ⑤计算原细胞悬液的细胞数 : 按照下???公??计算细胞密度： （细胞悬液的细胞数） /mL ??（ 4 个大格??细胞数/4)×2×10 4 说明：公??中除以 4 因为计数了 4 个大格的细胞数。 公??中乘以 2 因为细胞悬液于染液是 1 ： 1 稀释。 公??中乘以 104 因为计数???中??一个大格的体积为： 1.0mm （长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）?? 0.1mm 3 而 1mL ?? 1000mm 3 细胞计数??点： ①进行细胞计数时，??求悬液中细胞数目??低于 1×107 L -1 ，如果细胞数目很 少??进行离心??悬浮于少??培养液中。 ②??求细胞悬液中的细胞分散良好，???则影??计数准确性。 ③???样计数??， 应充分混匀细胞悬液， 尤其时多次???样计数时更??注????次???样 都??混匀，以求计数准确。 ④数细胞的原则是???数完整的细胞，若细胞???集??团时，???按照 1 个细胞计算。 如果细胞压在格线上时，则???计上线，??计下线，???计???线，??计左线。 ⑤??作时， 注??盖片下??能有气泡， 也??能让悬液??入??边槽中， ???则????新计 数。 ??学者易犯的错误： 计数??未将待测悬液???打???匀。滴入细胞悬液时盖玻片下 出现气泡。滴入悬液时的??太多，至使细胞悬液??入??边的槽中。 |
2楼2013-07-20 19:23:05
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