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hello菜菜36

新虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体融合后,怎么样终止PEG融合,结束后,怎样洗去PEG?

原生质体融合后,离心洗去PEG时,PEG也跟着离在下面,洗不掉,是不是对细胞有毒害作用,怎样避免呢?怎样终止融合呢?
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)

请问楼主你的原生质体制备过程是怎么样的啊?我在做枯草芽孢杆菌原生质体的制备,总是再生不成功,不知问题出在哪里。0.3mg\mL的溶菌酶,37度酶解30min,之后分别用无菌水和高渗液稀释,涂板计算形成率,双成平板法计算再生率。高渗液中用的是0.7M甘露醇
4楼2014-10-21 10:45:32
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15233630604

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
laozuzunzhe: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励应助交流! 2013-07-31 15:38:22
尽量采用分子量低于1000的PEG作融合剂,只是可能有毒害作用,具体机理目前不明。有的人在之前用离子交换树脂处理PEG,据说效果不错。
2楼2013-06-26 08:19:58
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-07-31 15:38:34
用高渗容易5倍以上PEG溶液稀释,一般就可以终止反应,没有具体考证,文献上有这一步。然后再离心洗2次即可
3楼2013-07-31 10:46:39
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nakamori0319

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-10-21 10:45:32
请问楼主你的原生质体制备过程是怎么样的啊?我在做枯草芽孢杆菌原生质体的制备,总是再生不成功,不知问题出在哪里。0.3mg\mL的溶菌酶,37度酶解30min,之后分别用无菌水和高渗液稀释,涂板计算形成率,双成平板法 ...

你好,我也在做原生质体,想问一下原生质体涂板,就是用涂布棒涂吗?涂布棒涂布会不会机械力太强把原生质体破坏掉呢?
5楼2014-10-21 14:53:28
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