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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 原生质体融合后，怎么样终止PEG融合，结束后，怎样洗去PEG？
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hello菜菜36

新虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体融合后，怎么样终止PEG融合，结束后，怎样洗去PEG？

原生质体融合后，离心洗去PEG时，PEG也跟着离在下面，洗不掉，是不是对细胞有毒害作用，怎样避免呢？怎样终止融合呢？
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1楼 2013-06-22 13:53:00
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)
请问楼主你的原生质体制备过程是怎么样的啊？我在做枯草芽孢杆菌原生质体的制备，总是再生不成功，不知问题出在哪里。0.3mg\mL的溶菌酶，37度酶解30min，之后分别用无菌水和高渗液稀释，涂板计算形成率，双成平板法计算再生率。高渗液中用的是0.7M甘露醇
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4楼2014-10-21 10:45:32
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15233630604

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
laozuzunzhe: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励应助交流！ 2013-07-31 15:38:22
尽量采用分子量低于1000的PEG作融合剂，只是可能有毒害作用，具体机理目前不明。有的人在之前用离子交换树脂处理PEG，据说效果不错。
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2楼2013-06-26 08:19:58
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zhuabachon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-31 15:38:34
用高渗容易5倍以上PEG溶液稀释，一般就可以终止反应，没有具体考证，文献上有这一步。然后再离心洗2次即可
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3楼2013-07-31 10:46:39
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nakamori0319

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-10-21 10:45:32
请问楼主你的原生质体制备过程是怎么样的啊？我在做枯草芽孢杆菌原生质体的制备，总是再生不成功，不知问题出在哪里。0.3mg\mL的溶菌酶，37度酶解30min，之后分别用无菌水和高渗液稀释，涂板计算形成率，双成平板法 ...

你好，我也在做原生质体，想问一下原生质体涂板，就是用涂布棒涂吗？涂布棒涂布会不会机械力太强把原生质体破坏掉呢？
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5楼2014-10-21 14:53:28
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